Pourquoi l'implantation orthotopique améliore-t-elle la validation de la cible dans le CCR ?

L'implantation orthotopique place les cellules cancéreuses dans le microenvironnement rénal d'origine, permettant des interactions tumeur-stroma physiologiquement pertinentes qui reflètent mieux la biologie de la maladie humaine. Cette croissance dépendante du contexte renforce la fiabilité de la validation des cibles en révélant des dépendances non apparentes dans les modèles ectopiques. Elle permet une détection mécanistique des facteurs de risque en reproduisant les voies de signalisation spécifiques au rein et les profils de métastase.

Comment l'isolement du rein comme site d'injection améliore-t-il la fidélité du pipeline de découverte ?

L'injection directe de cellules dans le rein sous péritoine intact assure un engraftement orthotopique précis, évitant la dissémination péritonéale qui pourrait fausser les mesures précoces de prise tumorale. Cette précision permet une quantification fiable de la cinétique de croissance de la tumeur primitive, une variable dépendante essentielle dans le criblage précoce de l'efficacité. Une administration reproductible, spécifique au site, permet des comparaisons cohérentes entre études dans les campagnes d'identification de composés candidats.

Quelles mesures quantitatives permettent l'évaluation longitudinale de la progression du CCR ?

Le volume tumoral, mesuré par imagerie au pied à coulisse ou par l'intensité du signal bioluminescent provenant de cellules de CCR marquées à la luciférase, permet un suivi longitudinal de la croissance de la tumeur primitive et de la charge métastatique. Ces données quantitatives fournissent des indicateurs objectifs et reproductibles pour évaluer les effets thérapeutiques au fil du temps. Des intervalles de mesure réguliers renforcent la puissance statistique des études précliniques d'efficacité.

Pourquoi les exigences de réplication sont-elles essentielles à la collaboration interfonctionnelle dans le développement de modèles de RCC ?

Des taux reproductibles de prise tumorale et de métastases chez les animaux et entre les expériences garantissent la fiabilité des données lorsqu'elles sont partagées entre les équipes de découverte, translationnelles et précliniques. Une performance constante du modèle réduit la variabilité des mesures d'efficacité, permettant des décisions fermes de type aller/ne pas aller basées sur des jeux de données partagés. Des protocoles standardisés de préparation chirurgicale et cellulaire sont essentiels pour maintenir cette reproductibilité entre les différents sites.

Quelles sont les capacités d'analyse statistique requises avant de mettre en œuvre ce modèle dans le criblage thérapeutique ?

La mise en œuvre exige une analyse de puissance pour déterminer les tailles de groupe capables de détecter des différences significatives en matière de croissance tumorale ou de suppression des métastases. Les données longitudinales nécessitent des modèles à effets mixtes ou une ANOVA à mesures répétées afin de tenir compte de la corrélation intra-animal au fil du temps. Des critères d'évaluation prédéfinis et des plans d'analyse statistique sont essentiels pour minimiser les biais et garantir une prise de décision conforme aux exigences réglementaires.

Génération d’un modèle de carcinome à cellules rénales : un protocole pour développer un modèle murin orthotopique de RCC par implantation intrarénale de cellules cancéreuses

JoVE Encyclopedia of Experiments

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0 vues • 3:49 min • April 30th, 2023

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L’implantation de cellules de carcinome à cellules rénales, ou RCC, d’une souris donneuse dans le rein d’une souris receveuse immunodéprimée conduit au développement d’un modèle de RCC orthotopique.

Pour développer un modèle orthotopique de RCC, commencez par placer une souris immunodéficiente anesthésiée en position couchée sur une planche de dissection. Maintenant, utilisez un scalpel pour faire une incision chirurgicale sur le flanc gauche de la souris, en gardant le péritoine sous-jacent intact.

Palpez la souris en appliquant une légère pression depuis le bas. Cette étape permet de visualiser le rein à travers le péritoine translucide. Ensuite, prenez une seringue contenant une suspension de cellules RCC dans un milieu approprié. À l’aide d’une aiguille, injectez la suspension cellulaire dans le rein sans endommager le péritoine.

Rétractez l’aiguille et scellez le site d’incision à l’aide d’un adhésif tissulaire. Laissez la souris récupérer et surveillez la croissance tumorale aux intervalles souhaités. Initialement, les cellules cancéreuses rénales injectées sont implantées dans le rein. Ces cellules prolifèrent ensuite pour former des tumeurs.

Par la suite, quelques cellules peuvent se détacher de la tumeur primaire et se disséminer dans la cavité péritonéale. Ces cellules tumorales migratrices peuvent envahir le tissu pulmonaire et métastaser pour former des tumeurs secondaires.

Pour préparer les cellules tumorales Renca, attachez d’abord la culture cellulaire avec 0,25 % de trypsine dans HBSS après rinçage au PBS. Neutralisez la réaction après 5 minutes avec un milieu RPMI complet. Transférez les cellules dans un tube conique pour la centrifugation et remettez le granulé en suspension dans du HBSS frais.

Après le comptage, ajustez le volume à une concentration de 2 fois 10 à six cellules par millilitre dans HBSS, et aspirez les cellules dans une seringue de 1 millilitre équipée d’une aiguille de calibre 18. Ensuite, placez un champ chirurgical stérile sur un coussin chauffant et confirmez le niveau approprié de sédation par pincement des orteils. Retirez les poils du flanc gauche de la souris et appliquez une pommade vétérinaire sur les yeux.

Ensuite, frottez le site d’implantation avec un antiseptique à la povidone iodée à 5 %, et utilisez un scalpel stérile pour faire une seule incision de 1 à 1,5 centimètre sur le flanc gauche, en prenant soin de ne pas pénétrer dans le péritoine. À l’aide de ciseaux, séparez le derme du péritoine, en tamponnant le site d’incision avec de la gaze de coton stérile pour éliminer tout sang. Ensuite, saisissez la tête avec la main gauche et soutenez le flanc avec la main droite pour localiser la rate à travers le péritoine.

À l’aide d’un doigt de la main droite, palpez la souris par le dessous. Les reins devraient devenir visibles. En gardant une prise ferme sur l’animal pour fournir une tension à travers le péritoine et les reins, demandez à un assistant de délivrer lentement 0,1 millilitre de cellules Renca à travers le péritoine intact jusqu’au centre du rein. Maintenez l’aiguille en place pendant 5 à 10 secondes pour réduire le reflux des cellules. Ensuite, fermez l’incision avec une fine couche d’adhésif tissulaire cyanoacrylate.