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0 vues • 2:57 min • April 30th, 2023
Le poisson-zèbre adulte contient un seul rein aplati attaché à la paroi dorsale du corps par des tissus conjonctifs. Il se compose de trois régions principales : la tête, le tronc et la queue. L’unité fonctionnelle du rein, les néphrons, est très ramifiée et s’écoule dans deux canaux collecteurs principaux.
Pour isoler le rein, préparez d’abord un poisson-zèbre adulte euthanasié avec sa face ventrale vers le haut. Faites une incision derrière l’opercule - un rabat osseux recouvrant les branchies - pour enlever la tête. Par la suite, faites une autre incision de la tête à la base de la nageoire caudale ou caudale pour exposer et retirer les organes internes.
Maintenant, épinglez les parois du corps pour visualiser le rein. Disséquez le tissu conjonctif sous-jacent pour détacher le rein de la paroi dorsale. Transférez l’organe dans un flacon contenant un tampon approprié, en le lavant soigneusement pour éliminer les débris. Le tampon aide à fournir des conditions physiologiques. Après le lavage, placez le rein, hydraté avec un tampon, sur une lame de verre.
Assurez-vous que le rein est complètement aplati, en faisant des incisions dans le tissu conjonctif si nécessaire. Cette étape facilite la visualisation pendant l’imagerie. Enfin, fixez la préparation de l’orgue à l’aide d’une lamelle fixée avec des morceaux de pâte à modeler à ses coins. L’argile aide à prévenir la déformation des tissus. Le tissu monté à plat est maintenant prêt pour l’analyse microscopique.
Pour commencer, décantez toute solution supplémentaire d’un poisson anesthésié et placez-la sur un mouchoir ou une serviette en papier. Après avoir enlevé la tête et les organes internes, utilisez des aiguilles de dissection ultrafines pour ouvrir les parois du corps. Localisez l’organe rénal qui adhère à la paroi dorsale de l’animal.
Utilisez des pinces fines pour détacher le rein de la paroi dorsale. Placez délicatement le rein dans un flacon en verre de 5 millilitres contenant 1x PBS et lavez-le trois fois pendant 5 minutes chacune. Retirez le rein à l’aide d’une pipette de transfert et placez-le sur une lame en verre propre avec une à deux gouttes de 1x PBS.
Utilisez une pince fine pour aplatir le rein sur la lame, en vous assurant qu’aucun tissu ne s’est enroulé ou renversé sur lui-même. Un outil en fil de tungstène peut être utilisé pour faire de petites incisions dans le tissu conjonctif afin de faciliter le positionnement à plat du rein.
Ensuite, placez de petits morceaux de pâte à modeler sur chaque coin d’une lamelle en verre de 18 x 18 millimètres. Placez lentement la lamelle sur le rein, en gardant un léger angle pour minimiser le piégeage des bulles d’air. Ajoutez une goutte supplémentaire de 1x PBS pour remplir l’espace entre la lamelle et la glissière si nécessaire.