Aspiration de liquide à partir de glomérules de souris : une méthode pour aspirer du liquide glomérulaire de souris à l’aide de la microponction médiée par deux photons

Dans le rein, le glomérule - un faisceau de petits vaisseaux sanguins enfermés dans la capsule de Bowman - initie la filtration du sang et expulse le liquide résiduel dans l’espace environnant de Bowman. L’étude du contenu du liquide glomérulaire aide à comprendre la physiologie rénale.

Pour aspirer le liquide glomérulaire, préparez une souris anesthésiée avec son rein extériorisé chirurgicalement. Maintenant, injectez un colorant fluorescent-dextran dans les vaisseaux sanguins derrière l’orbite oculaire de la souris. Les molécules de dextran fluorescent se déplacent dans la circulation sanguine et atteignent les reins.

En raison du poids moléculaire élevé du dextran, le colorant fluorescent est retenu dans le glomérule, ce qui lui confère une couleur verte. Sous un microscope à deux photons, qui permet de visualiser des structures profondément ancrées, localisez un glomérule approprié pour obtenir un accès adéquat au liquide glomérulaire.

Ensuite, alignez l’embout d’une micropipette recouverte de nanoparticules fluorescentes rouges avec l’axe latéral du rein. À l’aide d’un micromanipulateur, avancez la pointe de la pipette pour qu’elle pénètre dans le rein. Lorsque l’extrémité att