JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologie
0 vues • 3:38 min • July 8th, 2025
La surface dorsale de la langue de souris est recouverte de trois principaux types de protubérances surélevées appelées papilles, à savoir les papilles fongiformes, circonvallées et filiformes. Les papilles circonvallées, ou CVP, comprenant des tranchées épithéliales qui abritent les papilles gustatives, sont soutenues par une couche de tissu conjonctif - la lamina propria.
Pour isoler l’épithélium CVP, commencez par une souris euthanasiée en position couchée. Ensuite, incisez les joues et disséquez l’épaisse bande de tissu - le frein lingual - pour séparer la langue du plancher de la cavité buccale. Transférez la langue excisée dans un plat contenant un tampon réfrigéré.
Ensuite, découpez la partie antérieure de la langue. Injectez soigneusement un cocktail de digestion contenant des enzymes dispase et collagénase dans l’espace sous-épithélial de la région CVP, entre l’épithélium et les tissus sous-jacents. Rétractez l’aiguille tout en injectant la suspension dans la région.
Incuber la langue pendant la durée appropriée. Les dispases et les collagénases digèrent les protéines de la matrice extracellulaire dans le tissu conjonctif, facilitant la séparation de l’épithélium CVP du tissu. Après l’incubation, faites des incisions dans l’épithélium de la région CVP.
Séparez doucement l’épithélium relâché du tissu sous-jacent. Enfin, transférez l’épithélium CVP séparé dans un tube recouvert de protéines pour empêcher le tissu de coller à la paroi du tube. L’épithélium CVP peut être stocké pour un traitement ultérieur en aval.
Après avoir euthanasié une souris adulte, utilisez de grands ciseaux de dissection stériles pour couper les joues et casser la mâchoire. Ensuite, soulevez la langue et coupez le frein lingual pour séparer la langue du plancher de la cavité buccale. Coupez la langue et recueillez-la dans du dPBS stérile et glacé avec du calcium et du magnésium.
Sous un microscope à dissection, retirez et jetez la langue antérieure en coupant juste en avant de l’éminence intermolaire avec une lame de rasoir. Ensuite, à l’aide d’une lingette délicate, vous enlevez les poils et l’excès de liquide de la langue postérieure.
Ensuite, remplissez une seringue de 1 millilitre avec 200 à 300 microlitres de solution enzymatique d’injection et insérez une aiguille de calibre 30, 1/2 pouce juste au-dessus de l’éminence intermolaire jusqu’à l’intérieur des papilles circonvallées ou CVP. Injectez la solution enzymatique sous et sur les bords latéraux du CVP entre l’épithélium et les tissus sous-jacents. Retirez la seringue lentement et continuellement de la langue pendant l’injection de la solution.
Incuber la langue dans du dPBS stérile sans calcium/magnésium à température ambiante pendant précisément 33 minutes. À l’aide de ciseaux de dissection très fins, faites de petites incisions dans l’épithélium bilatéralement et juste en avant du CVP. Ensuite, pelez doucement l’épithélium en le soulevant à l’aide d’une pince fine. Une fois que l’épithélium de la tranchée est exempt de tissu conjonctif sous-jacent, placez-le dans un tube de microcentrifugation de 2 millilitres pré-enduit de FBS.