0 vues • 3:44 min • July 8th, 2025
Pour commencer, placez une souris anesthésiée en position couchée sur une planche de dissection. Faites une incision pour accéder à la cavité thoracique et exposer le cœur. Localisez l’aorte et ses branches - l’artère carotide commune gauche et l’artère brachiocéphale. Transectez ces artères pour isoler le cœur.
Immergez immédiatement le cœur excisé dans une boîte de Pétri contenant une solution tampon oxygénée riche en nutriments. En même temps, insérez une canule dans le cœur de manière à ce que son extrémité atteigne l’aorte ascendante. Utilisez une suture pour ligaturer la canule. Connectez la canule à une seringue contenant une solution de perfusion oxygénée.
Injectez la solution de perfusion dans le cœur. Cette étape permet au sang de quitter les artères coronaires et de s’écouler des veines pulmonaires. Ensuite, connectez le cœur canulé à l’appareil de Langendorff. Utilisez une pompe péristaltique pour effectuer une perfusion à un débit constant.
Dans ces conditions, le tampon perfusionne dans le cœur. Cela crée une pression de canulation qui ferme les valves aortiques, provoquant le déplacement du tampon dans les artères coronaires. Finalement, le tampon perfuse les muscles cardiaques rétrogradement et s’évacue plus tard à travers les veines pulmonaires. Un cœur perfusé avec succès est maintenant prêt pour d’autres applications en aval.
Après avoir euthanasié une souris mâle C57BL/6 âgée de 8 à 10 semaines, utilisez une pince à mouchoirs pour soulever la peau de la xiphoïde. Ensuite, à l’aide de ciseaux à tissus, faites une petite incision latérale à travers la peau. Effectuez une dissection contondante entre la peau et le fascia. Prolongez l’incision cutanée vers les aisselles en forme de V des deux côtés et poursuivez l’incision à travers la cage thoracique.
Ensuite, à l’aide d’une pince à tissus, clampez le sternum et déviez la cage thoracique vers le haut pour exposer complètement le cœur et les poumons. À l’aide d’une pince incurvée, décollez le péricarde. Si le thymus recouvre les gros vaisseaux, utilisez deux pinces incurvées pour déchirer le thymus des deux côtés. Ensuite, tirez doucement la base du cœur vers la queue jusqu’à ce que l’aorte et ses artères ramifiées soient visibles sous la forme d’un vaisseau sanguin en forme de Y.
Transect de l’aorte au niveau de l’artère carotide commune gauche. Ensuite, coupez l’artère brachiocéphale. Excisez le cœur et plongez-le immédiatement dans une boîte de Pétri contenant la solution de Tyrode pour laver et pomper le sang résiduel. Ensuite, transférez le cœur dans une autre boîte de Pétri contenant la solution 1.
Sous un stéréomicroscope, à l’aide de ciseaux à iris fins, coupez tout surplus de tissu. Expulsez les bulles d’air de la seringue. Ensuite, à l’aide de deux pinces à attacher droites, effectuez une canulation aortique rétrograde, en veillant à ce que tout le processus de canulation soit effectué sous la surface liquide. Ajustez la profondeur de la canulation de manière à ce que l’extrémité de la canule se trouve dans l’aorte ascendante, en prenant soin de ne pas pénétrer les valves aortiques.
Ensuite, avec une suture pré-nœud 3-0, ligaturez l’aorte à l’encoche de la canule. Injectez doucement la solution 1 de la seringue pour évacuer le sang résiduel. Ensuite, connectez le cœur canulé à l’appareil de Langendorff en prenant soin de ne pas introduire de bulles d’air dans le cœur. Après avoir connecté le cœur canulé à l’appareil de Langendorff, perfuser le cœur avec la solution 1 pendant environ 2 minutes.