Isolement des cellules interstitielles valvulaires de souris : une méthode enzymatique pour isoler et cultiver des CIV à partir de la valve aortique de souris

La valve aortique du cœur est une structure à trois feuillets composée des cellules interstitielles de la valve interne, ou VIC, réparties dans toute la matrice extracellulaire dense et des cellules endothéliales valvulaires sus-jacentes, ou VEC.

Pour isoler les CIV, préparez d’abord une souris euthanasiée en position couchée. Par l’incision médiane de l’abdomen et de la poitrine, exposez le cœur. Faites une petite entaille entre l’oreillette gauche et le ventricule, suivie d’une perfusion saline pour drainer le sang. Sectionnez l’aorte ascendante au niveau de l’arc aortique et prélevez le cœur.

Transectez et jetez les deux tiers distaux des ventricules avant de disséquer longitudinalement la partie restante du cœur pour révéler les feuillets de la valve aortique en forme de « U ». Exciser les feuillets et rincer avec un tampon réfrigéré pour éliminer le sang.

Par la suite, traitez les feuillets avec une solution de collagénase faiblement concentrée et incuber. À de faibles concentrations, la collagénase - une enzyme protéolytique - ne décompose que partiellement la matrice extracellulaire, délogeant les VEC de surface des feuillets.

Centrifugez et remplacez le surnageant contenant