Isolement des ovaires de souris néonatales : une intervention chirurgicale pour prélever une paire d’ovaires à partir d’un modèle de souris néonatale

Pour isoler les ovaires de souris néonatales, commencez par un bébé souris nouveau-né euthanasié en position couchée sur une plate-forme chirurgicale. Faites une longue incision chirurgicale sur la peau et la paroi du corps pour exposer la cavité abdominale. Ensuite, déplacez doucement les intestins pour révéler les cornes utérines sous-jacentes.

Les cornes utérines sont deux longues structures tubulaires qui convergent au niveau du col de l’utérus et s’étendent de la vessie vers les reins. Identifiez les ovaires - de petites glandes de forme ovale - situés juste en dessous des reins à l’extrémité des cornes utérines, reliées par les oviductes.

Maintenant, coupez le site d’attache de l’ovaire de chaque corne utérine pour libérer les ovaires. Transférez immédiatement les ovaires excisés dans une boîte de culture stérile contenant un milieu préchauffé approprié pour maintenir la viabilité des ovocytes dans le tissu. Placez la boîte de culture sur la platine chauffée d’un microscope à dissection.

À l’aide d’une aiguille, retirez avec précaution la bourse ovarienne, un sac de tissu conjonctif entourant l’ovaire et tout reste de l’oviducte. Enfin, transférez les ovaires dans une plaque multi-puits contenant un milieu. Les ovaires isolés peuvent être utilisés pour le traitement en aval.

Commencez par transférer 1 millilitre de milieu de dissection dans chaque boîte d’embryon en verre stérile. Après avoir éliminé les chiots âgés de 0 à 5 jours après la naissance, saisissez la peau recouvrant la paroi abdominale avec de fines pinces et incisez la peau et la paroi du corps. Ouvrez cette grande incision, exposant l’abdomen. La vessie est généralement engorgée à ce stade et peut être perforée pour faciliter la dissection.

À l’aide d’une pince d’horloger, écartez les tripes. Ensuite, de chaque côté, suivez les cornes utérines de la vessie jusqu’au rein. L’ovaire est une structure en forme de nuage située juste en dessous du rein, au sommet de l’utérus. Saisissez doucement l’ovaire et, à l’aide de ciseaux, libérez-le de l’utérus. Après avoir disséqué les deux ovaires, transférez-les dans des boîtes remplies de milieu de dissection chaud.

Utilisez un microscope de dissection avec une platine chauffée à 37 degrés Celsius pour disséquer les ovaires. À l’aide d’aiguilles à insuline, coupez le sac de la bourse et tout excès de matière, y compris la trompe de Fallope, jusqu’à ce qu’il ne reste que l’ovaire. Ensuite, transférez chaque ovaire dans le puits d’une assiette préparée à l’aide d’une pipette incurvée.