Moulage de résine du système biliaire : une technique d’analyse de l’architecture 3D du système biliaire dans un modèle murin à l’aide de l’injection de résine radio-opaque

Le système biliaire se compose du foie, de la vésicule biliaire et d’un réseau de canaux qui se rejoignent pour former le canal cholédoque ou C-B-D, qui transporte la bile vers l’intestin.

Pour le moulage de résine du système biliaire, prenez une souris qui a été perfusée pour éliminer le sang du foie et de la vésicule biliaire.

Placez la souris en position couchée.

Visualisez la cavité abdominale sous un microscope de dissection pour localiser la surface viscérale du foie afin d’identifier le sphincter d’Oddi - une couche musculaire présente à l’extrémité distale du CBD avant qu’il ne pénètre dans l’intestin.

Faites une incision oblique dans le CBD à côté du sphincter d’Oddi.

Insérez le tube dans le CBD. Connectez l’autre extrémité du tube à une seringue contenant une suspension de résine colorée et radio-opaque.

Injectez la suspension de résine dans le conduit.

La résine se déplace du CBD dans le réseau de canaux biliaires plus petits, se propageant finalement à l’intérieur du foie et de la vésicule biliaire. La propagation peut être suivie en visualisant le mouvement de la résine colorée à travers les bornes des petits conduits.

Retirez le tube et laissez la résine polymériser.

Obtenez les images micro-CT des conduits. La résine étant radio-opaque, elle ne permet pas aux rayons X de la traverser, ce qui contraste avec le système biliaire et aide à l’analyse de son architecture 3D.

Avant d’injecter de la résine dans le système biliaire de la souris, commencez à déplacer l’intestin et le pancréas vers le côté gauche de la souris à l’aide d’un coton-tige, imbibé de PBS, pour exposer le canal cholédoque et la veine porte. Ensuite, faites une petite incision transversale dans la veine cave inférieure. Retournez la face ventrale du foie vers le cœur pour exposer la surface viscérale et la région hilaire, et localisez le canal cholédoque qui part de la région hilaire à travers le pancréas et pénètre dans l’intestin au niveau du sphincter d’Oddi. À l’aide de la pince droite, dégagez la zone tissulaire environnante d’environ 5 millimètres du canal cholédoque.

Ensuite, en plaçant un fil de suture en soie sous le canal cholédoque, faites un nœud plat lâche autour du canal cholédoque. Tenez les ciseaux à ressort à plat contre le canal cholédoque pour faire une incision oblique vers le canal cholédoque à l’endroit où le canal cholédoque pénètre dans le pancréas et l’intestin, à côté du sphincter d’Oddi. Ensuite, mélangez 1 millilitre de résine jaune avec 50 microlitres d’agent de durcissement MV et remplissez une seringue Luer de 1 millilitre avec le mélange d’agent de durcissement de résine.

Connectez la seringue remplie avec le jeu de tubes #1 et appuyez sur le piston pour remplir le tube jusqu’à ce que le mélange d’agent de durcissement de résine s’écoule de l’extrémité du tube. À l’aide de la pince, redressez la zone autour de l’incision du canal cholédoque, avant d’insérer le tube dans l’ouverture du canal cholédoque, avec le bord le plus long de la pointe biseautée vers le bas vers le côté dorsal du canal biliaire. Ensuite, resserrez le nœud du fil de soie pour fixer le tube à l’intérieur du canal cholédoque.

Après avoir injecté la résine dans le canal cholédoque, observez la vésicule biliaire et les lobes hépatiques individuels. Massez le foie avec un coton-tige imbibé de PBS pour aider à répartir uniformément la résine. Les branches terminales des canaux biliaires remplis de résine seront faiblement visibles à la surface du foie. Arrêtez d’injecter la résine lorsque des points de résine apparaissent à la surface du foie, ou lorsqu’une résistance est rencontrée. Ensuite, retirez le tube en le retirant du canal cholédoque et serrez rapidement le nœud de soie à l’aide d’une pince pour empêcher la résine de s’échapper.