JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologie
0 vues • 3:48 min • July 8th, 2025
Dans un modèle murin de diabète insulino-dépendant, les îlots pancréatiques sont injectés via la veine porte hépatique à des fins thérapeutiques. Les cellules bêta de l’amas d’îlots produisent de l’insuline, une hormone qui régule la glycémie.
L’injection intraportale est une technique simple et efficace, mais les saignements postopératoires entraînent souvent la mort de l’animal modèle. Pour éviter cette complication, préparez une souris anesthésiée en position couchée. Rasez la région abdominale et appliquez une solution désinfectante. Faites une incision pour exposer la cavité péritonéale. Extériorisez les intestins de la cavité péritonéale sur une gaze humide pour exposer la veine porte sous-jacente.
Prenez une seringue à insuline préchargée d’îlots. Insérez l’aiguille directement parallèlement dans la veine porte, avec son biseau vers le bas. Prélevez un peu de sang dans une seringue pour mélanger les îlots, puis injectez lentement. Tirez et poussez le piston plusieurs fois pour infuser toute la suspension de l’îlot. Maintenant, placez une éponge de gélatine pour couvrir le site d’injection.
La gélatine, une matrice hémostatique, absorbe le sang et gonfle pour former un caillot stable sur le site de ponction, arrêtant ainsi le saignement. Ensuite, retournez l’intestin dans la cavité péritonéale et suturez l’incision. Remettez la souris dans sa cage d’origine et surveillez régulièrement les signes de rétablissement.
Après avoir confirmé une absence de réponse au réflexe de pédale, appliquez une pommade sur les yeux pour prévenir le dessèchement. Rasez l’abdomen de la souris anesthésiée pour enlever la fourrure, et désinfectez la zone chirurgicale avec trois lingettes alternées de 2 % d’iode et de 75 % d’alcool.
Ensuite, faites une incision de 1 à 1,5 centimètre dans l’abdomen et ouvrez la cavité péritonéale. Placez un morceau de gaze stérile autour de l’incision et utilisez des pinces ou des cotons-tiges pour transférer doucement l’intestin sur la gaze. Ensuite, couvrez l’intestin d’un morceau de gaze imbibée de solution saline et exposez la veine porte.
Pour arrêter le saignement induit par le transfert d’îlots à l’aide de mousse de gel, tenez l’aiguille avec le biseau vers le bas et positionnez la pointe de l’aiguille avec l’ouverture parallèle à la paroi de la veine porte. Avant d’insérer l’aiguille dans la veine porte, rétractez le piston pour aspirer 20 à 50 microlitres de sang dans la seringue à mélanger avec les îlots avant de perfuser les îlots dans la veine porte tout en enfonçant et en rétractant le piston à plusieurs reprises.
Lorsque tous les îlots ont été livrés, placez un morceau de mousse de gel d’environ 0,5 x 0,5 centimètre sur le site d’injection. À l’aide d’un coton-tige, appuyez sur la mousse de gel, tout en retirant l’aiguille de la veine porte. Maintenez le gel en place pendant environ deux minutes, en roulant la mousse de gel pour vous assurer qu’elle recouvre la veine porte.
Une fois que le saignement s’est arrêté, ramenez doucement l’intestin dans la cavité péritonéale dans sa position d’origine et injectez 500 microlitres de solution saline chaude dans la cavité abdominale. Utilisez des sutures pour fermer les couches musculaires et cutanées. Ensuite, placez la souris dans une cage propre sur un coussin chauffant avec surveillance jusqu’à la récupération complète de l’anesthésie, en administrant une analgésie toutes les 12 heures et en chauffant pendant 48 heures.