JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologie
0 vues • 4:02 min • July 8th, 2025
Commencer avec une souris femelle anesthésiée en position latérale droite sur une plate-forme chirurgicale. Ensuite, rasez l’abdomen de la souris et stérilisez la zone. Faites une incision cutanée paralombaire et disséquez les muscles abdominaux pour exposer la cavité abdominale.
Maintenant, localisez l’un des coussinets adipeux ovariens - le tissu adipeux entourant les ovaires. Les oviductes relient les ovaires à de longues structures tubulaires appelées cornes utérines. De plus, extériorisez doucement l’ovaire avec le coussinet adipeux ovarien, en le plaçant sur une gaze humide pour garder le tissu hydraté.
Maintenant, identifiez la bourse ovarienne - la fine membrane encapsulant l’ovaire et l’extrémité de l’oviducte. Incisez la bourse à l’opposé du hile ovarien, qui forme la frontière entre l’ovaire et le ligament ovarien. Le ligament ovarien relie structurellement l’ovaire à la corne utérine.
Après avoir exposé l’ovaire, retirez-le délicatement de la bourse ovarienne et clampez le hile ovarien pour exciser l’ovaire. Transférez l’ovaire excisé dans une plaque de culture contenant une solution saline réfrigérée.
Conservez l’ovaire de souris intact composé d’unités fonctionnelles - les follicules ovariens, chacun contenant un ovocyte, jusqu’à une utilisation ultérieure.
Avant de commencer la procédure, confirmez le niveau approprié de sédation par pincement des orteils et appliquez une pommade sur les yeux de l’animal. Placez la souris en position couchée sur une pile d’essuie-tout chauffés, et en commençant juste en dessous des côtes et en se déplaçant distalement, utilisez une tondeuse à cheveux à lame numéro 40 pour retirer un carré de poils de 2 à 3 centimètres à quelques millimètres de la ligne médiane de chaque côté de l’animal, avec une bande de poils de 1 à 2 2 centimètres couvrant la ligne médiane.
Après avoir administré l’analgésie, transférez l’animal sur un champ chirurgical stérile chauffé en position couchée et utilisez un morceau de gaze imbibée d’éthanol à 70 % de 2 centimètres suivi d’un gommage à la bétadine pour désinfecter la zone chirurgicale. Ensuite, faites une incision paralombaire de 1 à 1,5 centimètre dans l’une des zones chirurgicales, et deux ciseaux pour disséquer la peau du fascia sous-jacent.
Ensuite, faites une autre incision à travers le fascia et disséquez latéralement sous le fascia aussi superficiellement que possible jusqu’à ce que la cavité abdominale soit atteinte. Placez un champ chirurgical de gaze de 2 x 2 centimètres sur l’incision et mouillez la gaze avec une solution saline stérile.
À l’aide de petites pinces, localisez le tissu adipeux qui entoure l’ovaire et extrayez doucement le coussinet adipeux et l’ovaire sur le drap. Le coussinet adipeux ovarien apparaîtra plus blanc que le tissu adipeux environnant. Placez une pince Bulldog de 1,5 pouce sur le coussinet adipeux, en prenant soin de ne pas obstruer la bourse ovarienne, pour maintenir le tractus en place pendant la procédure.
Utilisez un microscope à dissection pour identifier la bourse ovarienne. Ensuite, saisissez la bourse à l’aide de deux pinces d’horloger et incisez la bourse du côté opposé du hile ovarien pour exposer l’ovaire.
Avant de décider où ouvrir la bourse, essayez de visualiser une poche dans la bourse où vous placerez le nouvel ovaire avant de suturer. N’ouvrir la bourse que dans la mesure nécessaire pour enlever l’ovaire endogène.
Retirez délicatement l’ovaire de la bourse et clampez le hile ovarien avec une pince d’horloger pour exciser l’ovaire et éviter les saignements. Ensuite, placez l’ovaire de la donneuse dans un verre de montre contenant une solution saline stérile à 4 degrés Celsius et placez un couvercle lâche sur le verre.