0 vues • 3:40 min • July 8th, 2025
L’imagerie intravitale consiste à visualiser les cellules d’un animal vivant à travers une fenêtre d’imagerie implantée dans l’animal. Il permet d’observer à long terme la dynamique cellulaire sans compromettre leurs fonctions.
Pour commencer, prenez une souris transgénique anesthésiée préalablement implantée avec une fenêtre d’imagerie pancréatique soutenue par une plaque métallique. La plaque de base sépare spatialement le pancréas de l’intestin, réduisant ainsi les artefacts de mouvement des mouvements physiologiques tels que le péristaltisme.
La souris transgénique exprime la protéine fluorescente verte ou GFP sous le promoteur du gène de l’insuline exprimé dans les cellules bêta des îlots pancréatiques.
Ensuite, tenez fermement la queue de la souris et vaporisez un désinfectant pour éliminer tous les contaminants de surface. Insérez un cathéter dans la veine latérale de la queue. Injectez une solution contenant des anticorps marqués à l’aide d’une sonde fluorescente rouge dans la veine de la queue. Ces anticorps se lient aux cellules qui tapissent les vaisseaux sanguins, les colorant en rouge.
Maintenant, passez la souris à une configuration de microscopie intravitale. Insérez la fenêtre d’imagerie pancréatique dans le support de fenêtre. Commencez l’imagerie à faible grossissement pour localiser les amas d’îlots fluorescents verts entourés de vaisseaux sanguins fluorescents rouges. Augmentez le grossissement pour obtenir une imagerie de haute qualité au niveau cellulaire des cellules bêta individuelles.
Commencez par allumer le microscope intravital, y compris la puissance laser. Pour insérer un cathéter vasculaire, appliquez une pression sur le côté proximal de la queue avec l’index et le troisième doigt. Si nécessaire, chauffez la queue avec une lampe. Désinfectez la veine de la queue avec un spray d’éthanol à 70 %, puis insérez un cathéter de calibre 30 dans la veine latérale de la queue et visualisez la régurgitation de sang dans le tube PE-10. Appliquez du ruban de soie sur le cathéter pour le stabiliser.
Injecter du FITC dextran et du DTRM dextran, ou d’autres sondes fluorescentes, selon le cas, selon la combinaison de sondes fluorescentes. Insérez une sonde rectale pour contrôler automatiquement la température corporelle avec le système de coussin chauffant homéothermique. Ensuite, insérez la fenêtre d’imagerie pancréatique préparée lors de la configuration de la microscopie intravitale dans le support de fenêtre. Transférez la souris de la plate-forme chirurgicale à la scène d’imagerie.
Pour effectuer une imagerie intravitale, commencez par imager le pancréas à un faible grossissement, par exemple quatre fois, pour balayer toute la vue du pancréas dans la fenêtre d’imagerie pancréatique. Une fois que la région d’intérêt a été déterminée, passez à une lentille d’objectif à grossissement plus élevé, comme 20 fois ou 40 fois, pour effectuer une imagerie au niveau cellulaire avec une résolution latérale et axiale d’environ 0,5 micromètre et 3 micromètres, respectivement.
Effectuez une imagerie z-stack ou time-lapse pour observer la structure 3D ou la dynamique au niveau cellulaire, comme la migration cellulaire.