0 vues • 4:44 min • July 8th, 2025
Commencez par placer une souris anesthésiée en position couchée. Disséquez la cavité thoracique pour visualiser le cœur. Utilisez une pipette équipée d’une pointe à large alésage pour appliquer une pression d’aspiration et aspirer le cœur du corps de la souris dans la pointe. Excisez le cœur au niveau de l’aorte pour le récolter du corps de la souris.
Immergez le cœur isolé dans un bécher contenant un tampon riche en nutriments complété par un agent anticoagulant. L’anticoagulant dans le tampon forme un complexe avec le calcium présent dans les cardiomyocytes - les cellules du muscle cardiaque, cessant la contraction des muscles cardiaques et empêchant la coagulation sanguine.
Ensuite, placez le cœur, face apex vers le bas, sur un support en forme de cœur conservé dans une boîte de Pétri contenant un tampon approprié. Clampez l’aorte au-dessus des oreillettes et transférez le cœur clampé dans une plaque de perfusion.
Par la suite, prenez un ensemble seringue-aiguille contenant un tampon de perfusion approprié. Insérez l’aiguille dans le ventricule gauche en perçant la chambre ventriculaire.
Avec l’aorte clampée, l’injection intraventriculaire met sous pression les valves aortiques pour qu’elles s’ouvrent. Par conséquent, le tampon évacue le sang antégrement à travers les artères coronaires, perfusant complètement les muscles cardiaques. Enfin, le tampon s’écoule par les veines pulmonaires. Cela permet d’obtenir un cœur perfusé avec succès pour les applications en aval.
Pour le prélèvement du cœur de souris, après avoir confirmé l’euthanasie et rasé l’abdomen, ouvrez rapidement la cavité thoracique pour exposer le cœur, et utilisez une pipette de transfert en plastique avec la pointe coupée à peu près à la taille du cœur, pour aspirer le cœur dans la pipette. Soulevez la pipette pour créer suffisamment d’espace pour insérer des ciseaux incurvés, et utilisez les ciseaux pour exciser le cœur du côté dorsal, en prenant soin de ne pas endommager les oreillettes.
Immédiatement, placez le cœur dans un bécher en verre de 30 millilitres contenant du CIB EGTA glacé pendant environ 1 minute. Lorsque les contractions ont cessé, placez le cœur dans une boîte de culture de 35 millilitres contenant du CIB EGTA glacé, puis retirez le poumon et les autres tissus visibles.
Placez le cœur grossièrement nettoyé sur un support de cœur rempli de CIB EGTA réfrigéré, face apex vers le bas, et placez le support sous un microscope stéréoscopique. Retirez la graisse et les tissus conjonctifs autour de l’aorte. Si la longueur de l’aorte coupée est trop longue, coupez l’aorte juste sous l’artère brachiocéphale et orientez le cœur de manière à ce que la surface antérieure soit tournée vers l’avant. Utilisez une pince à épiler pour soulever l’extrémité de l’aorte et utilisez une petite pince vasculaire pour serrer l’aorte près des oreillettes, tout en appuyant doucement sur les oreillettes.
Ensuite, placez le cœur clampé sur une plaque de perfusion, face antérieure vers le haut, et hydratez le cœur avec quelques gouttes de CIB EGTA. Pour une perfusion antérograde, chargez une seringue de 20 millilitres contenant du CIB EGTA préchauffé connecté à un tube d’extension flexible et à une aiguille d’injection marquée, sur la pompe à perfusion, et démarrez la pompe à un débit de 0,5 millilitre par minute. Lorsque l’aiguille et la pompe ont été remplies, placez l’aiguille d’injection sur la plaque de perfusion, avec le côté le plus court de la forme diagonale à l’avant, et faites glisser l’aiguille jusqu’à ce qu’elle touche juste l’apex du cœur.
Soigneusement, insérez l’aiguille près de l’apex du ventricule gauche, dans la chambre ventriculaire sans tordre ou détacher l’aiguille de la plaque, en regardant la marque pour estimer la profondeur d’insertion de l’aiguille. Lorsque l’insertion de l’aiguille est terminée, le sang devrait commencer à s’écouler de l’artère coronaire.
Utilisez du ruban adhésif pour fixer l’aiguille d’injection à la plaque et augmentez la vitesse de la pompe à 1 millilitre par minute. Si le cœur est perfusé avec succès, l’écoulement du tampon dans le capillaire doit être visible juste sous l’épicarde.