Extraction de la cupule rétinienne de la souris : une intervention chirurgicale pour obtenir une cupule rétinienne intacte de l’œil de la souris

L’œil murin est recouvert de trois couches : la sclère fibreuse la plus externe, la couche choroïde moyenne et la rétine la plus interne. La cavité en forme de coupe entre la rétine et le cristallin contient l’humeur vitrée, un milieu gélatineux qui aide à transmettre la lumière à la rétine. À son tour, la rétine transmet l’information visuelle résultante via le nerf optique au cerveau.

Pour extraire la coupe rétinienne, prenez une souris euthanasiée et énucléez son œil. Immergez l’œil dans une boîte de Pétri contenant un tampon glacé approprié pour éviter la dégradation des tissus. Placez la boîte de Pétri sous un microscope de dissection.

Coupez les restes du nerf optique à partir de la base du globe oculaire. Faites une petite incision à la jonction de la rétine et de la cornée – un revêtement transparent autour du cristallin. À l’aide de cette ouverture, faites une coupe circulaire complète le long de la jonction rétine-cornée pour détacher le cristallin et le gel de l’humeur vitrée de l’œil.

Retirez le cristallin et l’humeur vitrée pour obtenir un œilleton semi-circulaire contenant la rétine bordée de choroïde et de sclère. Créez plusieurs coupures superficielles dans toute la partie sclérale de l’œilleton. Utilisez ces coupes pour séparer les couches externes de l’œil afin d’obtenir une cupule rétinienne intacte pour les applications en aval.

Énucléez les yeux d’une souris adulte euthanasiée et placez-les dans du PBS glacé dans une boîte de Pétri, puis placez la boîte de Pétri sous un microscope de dissection. À l’aide de micro-ciseaux, coupez le nerf optique, puis retirez soigneusement les muscles droits supplémentaires attachés à l’extérieur du globe oculaire.

À l’aide d’une aiguille de calibre 30, percez un trou au bord de la cornée. Ensuite, utilisez des micro-ciseaux de dissection fine pour faire une coupe circulaire le long du bord de la cornée. À l’aide d’une pince à dissection tranchante, retirez la cornée, le cristallin et l’humeur vitrée de l’œilleton. Faites plusieurs petites incisions sur la couche sclérale au bord de l’œilleton à l’aide de micro-ciseaux à dissection fine. Utilisez deux pinces à dissection tranchantes pour tenir le tissu scléral de chaque côté et tirez très soigneusement sur la couche sclérale pour la retirer de la rétine neurale. Répétez cette opération autour de l’œilleton jusqu’à ce que toute la sclérotique soit retirée et qu’une cupule rétinienne intacte soit obtenue.