0 vues • 4:19 min • July 8th, 2025
Pour commencer, fixez une souris euthanasiée en position couchée. Inciser latéralement à travers la paroi thoracique pour accéder à la cavité thoracique et exposer le cœur. Exciser l’oreillette droite et injecter une solution saline dans le ventricule gauche pour drainer le sang du cœur.
Sectionnez les connexions vasculaires en coupant les principaux vaisseaux sanguins. De plus, inciser l’artère pulmonaire à une distance appropriée de la jonction ventricule artérielle, qui sert de conduit pour la pressurisation. Retirez les ventricules pour exposer la face ventriculaire à la pression atmosphérique.
Maintenant, fixez une tubulure de pressurisation dans l’artère pulmonaire, en assurant un dégagement adéquat entre la jonction ventriculo-artérielle et l’extrémité de la tubulure pour permettre aux feuillets de la valve de se déplacer pendant la pressurisation.
À la tubulure, raccordez le réservoir rempli de solution saline fixé à une hauteur calculée par rapport à la valve pulmonaire en fonction de la pression hydrostatique souhaitée à appliquer sur le côté artériel de la valve. L’écoulement unidirectionnel du côté artériel avec la pression hydrostatique appliquée entraîne la fermeture des feuillets valvulaires et la distension du tronc pulmonaire.
Par la suite, introduisez un fixateur approprié dans le réservoir et poursuivez la perfusion. Le fixateur perfusé stabilise la morphologie cellulaire et l’architecture tissulaire.
Placez une gaze imbibée de fixateur sur le tissu pour fixer le tissu entourant la valve et éviter le dessèchement. Conservez la valve cardiaque fixe dans le fixateur jusqu’à ce qu’elle soit utilisée.
Commencez par autoclaver les outils nécessaires à la dissection de la souris, y compris les ciseaux fins, les micro-pinces, les pinces microvasculaires, les pinces d’application de pinces, les porte-micro-aiguilles, les ciseaux à ressort et les écarteurs.
Après avoir euthanasié une souris C57 Black 6 adulte, placez-la en position couchée dorsale sur un plateau, fixez ses membres avec du ruban adhésif et effectuez la thoracotomie. Exposez le cœur en enlevant tout excès de tissu adipeux et de fascia, puis retirez l’oreillette droite et perfuser le ventricule gauche avec une solution saline à température ambiante.
Retirez tout le cœur en sectionnant la veine cave supérieure, la veine cave inférieure, l’artère pulmonaire et l’aorte, et coupez environ 2 millimètres au-dessus de la jonction ventriculo-artérielle, qui servira de conduit pour la pressurisation.
Retirez les ventricules gauche et droit pour exposer les chambres à la pression atmosphérique, en vous assurant que la structure du tronc pulmonaire n’est pas affectée en retirant les ventricules. Tubulure de pressurisation anastomose avec l’artère pulmonaire, laissant une distance d’environ 1 millimètre entre la jonction sino-tubulaire et l’extrémité de la tubulaire, pour s’adapter aux grands mouvements des feuillets et du tronc pulmonaire.
Élevez le réservoir à une pression physiologique analogue et remplissez-le de solution saline. Testez le système de circulation pour vous assurer qu’il n’y a pas de blocages ou de bulles d’air. Fixez un robinet d’arrêt à la valve pulmonaire anastomosée et assurez-vous d’un débit adéquat à travers le tube en changeant la voie d’évacuation. Une fois que le débit est suffisant, basculez l’écoulement vers la valve pulmonaire anastomosée, et assurez la pressurisation du tronc pulmonaire, identifiée par la distension du tronc.
Après avoir confirmé la pressurisation du tronc pulmonaire, incorporer progressivement la solution fixatrice primaire, jusqu’à ce que 25 % de la capacité du réservoir de la solution saline soit purgée. Placez une gaze imbibée de fixateur sur l’échantillon de tissu pour éviter le dessèchement. Perfuser le fixateur pendant 3 heures, en remplissant le réservoir pour maintenir une pression constante.
Après la perfusion, conservez la valve cardiaque dans la solution fixatrice à 4 degrés Celsius jusqu’à l’utilisation, jusqu’à 1 semaine.