0 vues • 3:53 min • July 8th, 2025
Commencez avec une souris euthanasiée en position couchée. Stérilisez son postérieur. Retirez chirurgicalement la peau et le fascia (une mince enveloppe de tissu conjonctif sous la peau) pour exposer les muscles sous-jacents des membres postérieurs.
Localisez le muscle tibial antérieur ou TA sur la face latérale du tibia. En tenant le tendon distal TA, détachez le muscle du tissu sous-jacent. Coupez le muscle près du genou pour exciser le muscle TA, révélant le muscle long extenseur des doigts ou EDL sous-jacent situé dans le compartiment antérieur de la patte postérieure.
Incisez le tendon distal de l’EDL et tirez le muscle EDL vers le genou. Coupez le tendon proximal de l’EDL pour exciser le muscle EDL. Transférez le muscle prélevé dans un tube avec un milieu préchauffé contenant des enzymes collagénases et incubez pendant la durée appropriée. Les collagénases décomposent le tissu conjonctif entourant chaque fibre musculaire ou myofibre dans le muscle. Cette étape de digestion détache les myofibres de la couche interne du muscle.
Après l’incubation, transférez soigneusement le muscle digéré dans une plaque multipuits contenant un milieu préchauffé pour augmenter le taux de survie des myofibres. Transférez la plaque sur la platine chauffée d’un stéréomicroscope. Maintenant, triturez doucement le muscle digéré pour dissocier et libérer les myofibres individuelles dans la solution.
Les myofibres EDL isolées peuvent être utilisées pour une analyse ultérieure en aval.
Vaporisez tout le matériel et les membres postérieurs de la souris avec de l’éthanol à 70 %. Utilisez des ciseaux fins et durcis et des pinces fines pour enlever la peau et exposer les muscles sous-jacents. Retirez le fascia environnant avec la pince à fines courbes sans endommager les muscles sous-jacents.
Pour enlever le tibial antérieur ou TA, saisissez le tendon distal TA avec une pince et coupez-le avec des ciseaux fins. Tout en tenant le TA au niveau du tendon, tirez-le vers le genou et coupez le muscle près du genou pour exposer le muscle EDL.
Soulevez le tendon distal EDL à l’aide d’une pince incurvée et coupez-le avec de fines ciseaux à ressort Vannas. Exposez le tendon proximal de l’EDL en tirant soigneusement l’EDL vers le genou. Ensuite, coupez le tendon proximal avec des ciseaux. Incuber les muscles EDL dans le tube de réaction à 37 degrés Celsius dans un bain d’eau circulant. Arrêtez la digestion lorsque les muscles se détendent et que des myofibres uniques sont visibles.
À l’aide d’un microscope binoculaire stéréo équipé d’une plaque chauffante, rincez les muscles avec un milieu d’isolation chaud, à l’aide de la pipette de grand calibre. Dissociez les muscles avec la pipette de grand calibre, jusqu’à ce que le nombre souhaité de myofibres flotte librement dans la solution.