JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologie
0 vues • 3:37 min • July 8th, 2025
Le cerveau des vertébrés contient un système d’échange de fluides spécialisé analogue au système lymphatique, appelé système glymphatique. Dans ce système, le liquide céphalo-rachidien ou LCR pénètre dans les espaces périartériels, permettant l’échange de soluté via des canaux spécialisés présents dans les extrémités astrocytaires. Le LCR porteur de soluté s’écoule dans l’espace périveineux pour évacuer les solutés du cerveau. Cette voie est importante pour la physiologie du cerveau et peut être visualisée à l’aide de molécules traceurs fluorescentes.
Pour commencer, préparez un porc anesthésié en position couchée, la tête fléchie vers le haut. Faites une incision sous la crête occipitale. Rétractez les muscles pour exposer la citerne magna - une ouverture dans l’espace sous-arachnoïdien entre le cervelet et le bulbe rachidien.
Insérez soigneusement une canule à travers la dure-mère dans la citerne magna. Appliquez de la colle dentaire autour de la canule. Laissez-le durcir. Par la suite, injecter des molécules traceurs fluorescentes en suspension dans le LCR artificiel à un rythme approprié. Une solution de traceur visiblement pulsée à la base de la canule confirme la réussite de l’administration.
Après l’injection, repositionnez les couches de tissu et suturez l’incision. Placez une gaze de coton humide sur l’incision pour limiter les pertes de chaleur. Laissez les molécules traceuses circuler pendant la période souhaitée. Lorsqu’elles sont visualisées au microscope à fluorescence, les molécules traceuses aident à visualiser la distribution du LCR dans le système glymphatique.
Assurez-vous qu’une personne élève et fléchit la tête et le cou de l’animal, tandis que l’autre palpe la citerne magna, en notant son emplacement anatomique. Introduisez lentement et soigneusement une canule de calibre 22 dans la citerne magna à travers la dure-mère, à un angle oblique par rapport à l’axe longitudinal. Ensuite, rétractez l’aiguille de la canule et placez un capuchon sur le verrou.
Commencez par appliquer de la superglue et un accélérateur à l’endroit où la canule pénètre dans le tissu. Ensuite, appliquez le ciment dentaire. Attendez cinq minutes que le ciment durcisse. Retirez délicatement le capuchon de la canule. Fixez la canule à l’extrémité mâle du taraud de ligne IV avec le traceur à l’aide d’une rallonge de 10 centimètres.
Injectez le traceur lentement à un rythme de 100 microlitres par minute soit à la main, soit à l’aide d’une pompe à micro-infusion. Retirez le robinet de la ligne IV et remplacez-le par le capuchon. Vérifiez si le traceur est visible, pulsant à la base de la canule. Ensuite, placez des sacs de sable sous le cou de l’animal pour maintenir une certaine flexion.
Relâchez la tête et laissez l’animal en position couchée et au repos. Relâchez les écarteurs auto-retenus et remplacez les muscles. Utilisez les pinces à serviettes chirurgicales pour rassembler la peau sur les muscles. Utilisez d’abord de la gaze, puis une couverture pour couvrir les pinces à serviettes et l’incision afin de limiter les pertes de chaleur. Laissez le traceur circuler pendant la durée souhaitée.