Isolement des cellules IPE et RPE : une technique pour obtenir des cellules épithéliales pigmentées à partir d’un œil porcin isolé

L’œil porcin contient une population de cellules épithéliales cuboïdes qui contiennent de nombreux mélanosomes - des organites qui aident à l’absorption de la lumière - ce qui donne l’apparence pigmentée de ces cellules. Selon l’emplacement de ces cellules, les cellules épithéliales présentes sous la rétine sont appelées cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes, ou cellules RPE, et celles qui tapissent l’iris sont appelées cellules épithéliales pigmentaires de l’iris, ou cellules EPI.

Pour isoler les cellules EPR et EPI, commencez par prélever un œil porcin. Immergez l’œil dans une solution désinfectante appropriée pour éliminer les microbes collés à la surface de l’œil.

Retirez l’œil de la solution désinfectante et utilisez une aiguille pour faire une petite incision près de l’iris. Utilisez cette ouverture pour faire une coupe circonférentielle complète le long de la limite de l’iris. Cela détache le segment antérieur de l’œil contenant l’iris du bulbe oculaire postérieur, qui a la rétine. Retirez la portion excédentaire et transférez l’iris et le bulbe oculaire dans des boîtes de culture séparées.

Ajouter un milieu de culture adapté dans la plaque contenant l’iris, et dans le bulbe oculaire. Grattez le tissu. La force mécanique détache les cellules épithéliales, les libérant dans le milieu. Aspirez les cellules IPE et RPE détachées. Épépinez-les dans des plaques de culture séparées et incubez jusqu’à ce qu’ils soient utilisés ultérieurement.

Nettoyez les tissus musculaires et la peau restants des yeux, désinfectez les yeux dans une solution à base d’iode et rincez-les avec du PBS.

Pour isoler les cellules IPE, retirez le cristallin et retirez l’iris, comme illustré. Après avoir préparé deux iris, ajoutez 1 millilitre de milieu complet et isolez les cellules en grattant avec une pipette Pasteur plate polie au feu, puis comptez et ensemencez les cellules. Placez la plaque dans l’incubateur.

Pour isoler les cellules EPR, retirez le vitré et la rétine du segment postérieur et placez le bulbe dans une boîte de Pétri. Remplissez l’ampoule avec 1 millilitre de milieu complet. À l’aide d’une pipette Pasteur incurvée polie au feu, retirez les cellules RPE, collectez la suspension cellulaire à l’intérieur de l’ampoule à l’aide d’une pipette de 1 000 microlitres et transférez-la dans un tube de 1,5 millilitre pour la remise en suspension. Ensuite, comptez et ensemencez les cellules, puis incubez la plaque comme démontré précédemment.