JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologie
0 vues • 3:17 min • July 8th, 2025
La partie antérieure de l’œil est recouverte par la cornée - une couche transparente qui permet la transmission des rayons lumineux. La cornée s’étend dans la sclérotique - un tissu protecteur blanc autour de l’œil. La partie de l’œil qui se compose de la cornée entourée d’un mince anneau de la sclérotique est le bouton cornéoscléral.
Pour exciser le bouton cornéo-scléral, placez un œil de porc intact sur une boîte de Pétri. Retirez la conjonctive - une couverture mucilagineuse autour de la sclérotique - ainsi que les muscles extraoculaires environnants pour accéder à la couverture sclérale. Traitez l’œil avec une solution désinfectante appropriée pour éliminer tout micro-organisme contaminant de la surface de l’œil.
Lavez le désinfectant avec une solution tampon. Transférez l’œil désinfecté dans une boîte de culture fraîche. Faites une incision sur la sclérotique près de la limite cornéenne. À l’aide de cette ouverture, faites une coupe circonférentielle complète pour diviser l’œil en deux fragments.
Visualisez la face intérieure du segment frontal pour localiser la couche uvéale attachée à la sclère. Ce tissu se compose d’un iris pigmenté, d’un corps ciliaire en forme d’anneau et d’une partie de la couche choroïde vasculaire. Détachez l’uvée pour visualiser la couche cornéosclérale. Conservez le bouton dans une solution tampon stérile pour d’autres dosages.
Utilisez une pince stérile pour transférer le globe oculaire dans une boîte de Pétri. Retirez la conjonctive et le tissu musculaire autour du globe oculaire à l’aide d’une lame de scalpel # 15 et d’une pince. Ensuite, tout en tenant le nerf optique avec la pince, soulevez doucement le globe oculaire et transférez-le dans un bocal d’un demi-litre rempli de PBS stérile.
Une fois que tous les globes oculaires sont débarrassés des tissus environnants, utilisez une pince stérile pour les déplacer dans un autre pot d’un demi-litre rempli de povidone iodée à 3 % de PBS. Une fois que les globes oculaires ont été dans le bocal pendant une minute, transférez-les dans un troisième bocal contenant du PBS stérile.
Placez un globe oculaire sur une boîte de Pétri propre et utilisez la pince pour le maintenir stable. Avec une lame de scalpel # 10A, faites une incision près de la cornée. Utilisez des ciseaux pour exciser la cornée, en laissant environ 3 millimètres de sclérotique autour d’elle. Assurez-vous que l’extrémité tranchante des ciseaux se trouve dans l’espace supra-choroïdien et ne perce pas l’iris.
Tenez le bouton cornéoscléral avec une pince et utilisez une autre paire de pinces à extrémité pointue pour séparer doucement le tissu uvéal. Ensuite, soulevez le bouton cornéo-scléral pour le séparer du reste du globe oculaire. Rincez brièvement le bouton dans une solution à 1,5 % de povidone iodée dans du PBS. Ensuite, placez le bouton dans du PBS stérile dans une plaque à 12 puits.