Culture du segment antérieur de l’œil : méthode de culture de la cornée portant le segment antérieur de l’œil porcin

Pour la culture du segment antérieur de l’œil, commencez par une boîte de culture appropriée. La boîte de culture a une scène surélevée au centre, reliée à deux orifices de fluide pour l’entrée et la sortie.

Tout d’abord, placez un segment antérieur de l’œil porcin frais contenant de la cornée sur la scène. Ensuite, placez une bague de serrage sur le segment de l’œil et fixez-le. Ensuite, préparez un dispositif de perfusion composé d’une seringue remplie d’un milieu de culture approprié. Connectez la seringue à une valve, un filtre et un tube avec un moyeu d’aiguille plié à l’autre extrémité.

Préparez un réservoir assemblé de la même manière à l’aide d’une seringue vide. Maintenant, connectez les moyeux de l’aiguille de la perfusion et de la configuration du réservoir aux orifices d’entrée et de sortie, respectivement. Perfuser doucement le support et laisser le segment antérieur se gonfler.

Continuez la perfusion et laissez les bulles et l’excès de fluide s’écouler dans le réservoir. Ensuite, incubez la boîte de culture à la hauteur souhaitée et dans des conditions physiologiques standard. Il en résulte un modèle tridimensionnel qui simule l’architecture complexe de l’œil dans des conditions physiologiques.

Connectez un transducteur de pression à la vanne du réservoir pour surveiller en permanence la pression oculaire. Le segment antérieur de l’œil est maintenant prêt à être utilisé pour d’autres expériences.

Après avoir placé le segment antérieur dans la boîte de Pétri, mouillez un coton-tige dans le support et tamponnez doucement au centre de la cornée pour éliminer tout pigment. Tenez les yeux avec une pince et retirez le pigment supplémentaire autour de la sclérotique en essuyant. Placez le segment antérieur inversé sur la région surélevée de la parabole inférieure, en veillant à ce que la cornée reste au centre de la région surélevée.

Positionnez la bague de serrage sur le segment antérieur nouvellement placé et serrez doucement les vis avec la clé coudée. Fixez les deux connecteurs fluidiques avec des joints toriques aux ports filetés au bas de la parabole. Au premier connecteur fluidique, fixez un moyeu à aiguille courbée à 90 degrés de calibre 18, une longueur de tube, un moyeu à aiguille de calibre 18, un filtre de seringue en nylon, une valve à trois voies et une seringue de 20 millimètres remplie de média.

Au deuxième connecteur fluidique, fixez un moyeu d’aiguille courbée à 90 degrés de calibre 18, une longueur de tube, un moyeu à aiguille de calibre 18, une vanne à trois voies, comme démontré pour le premier connecteur de fluide, puis fixez la partie cylindrique d’une seringue stérile de 10 millilitres, qui agira comme un réservoir pour récupérer le liquide et les bulles.

En gardant les vannes à trois voies ouvertes de manière appropriée aux seringues, poussez doucement le fluide à travers le système à l’aide de l’orifice de connecteur du premier fluidique. Pour gonfler le segment antérieur, remplissez le tube de média, puis remplissez le réservoir. Retirez les bulles en poussant doucement le média dans le plat et retournez le plat pour faire sortir les bulles.

Placez la boîte de culture d’organe du segment antérieur dans l’incubateur de culture cellulaire. Dirigez les conduites de tubes à travers le bas de la porte de l’incubateur pour éviter toute interférence avec l’ouverture et la fermeture de la porte. Positionnez les conduites de tuyauterie avec le réservoir au niveau de l’instrument du transducteur de pression. Connectez la vanne latérale à trois voies à la configuration du transducteur de pression pendant que le PBS s’écoule dans la conduite pour éviter que les bulles d’air ne pénètrent dans les conduites de tuyauterie.