0 vues • 2:31 min • July 8th, 2025
La décongélation d’embryons est un processus dans lequel des embryons congelés cryoconservés sont réchauffés et réhydratés, restaurant ainsi leur activité biologique.
Pour décongeler des embryons de lapin cryoconservés dans une paille cryogénique scellée, retirez la paille de l’azote liquide. Les embryons, avec un volume minimal de milieux contenant un cryoprotecteur, sont physiquement isolés par de l’air et des segments de milieux à l’intérieur de la paille. Positionnez brièvement la paille dans l’air, facilitant la libération des vapeurs d’azote liquide piégées, qui causent autrement des dommages aux embryons lors de l’exposition à des températures plus chaudes.
L’augmentation rapide des températures de l’azote liquide cryogénique à des températures de congélation plus élevées initie la formation de cristaux de glace dans la paille cryogénique, risquant d’endommager l’embryon. Lorsque des cristaux de glace commencent à se former, plongez immédiatement la paille dans un bain-marie à température contrôlée avec une agitation douce pour une décongélation uniforme. Cette étape élimine les cristaux de glace, protégeant ainsi les embryons des dommages causés par les cristaux de glace.
Retirez le bouchon de paille. Coupez l’extrémité scellée de la paille ; Fixez un microdistributeur pour libérer le contenu dans une plaque de culture contenant du saccharose. Le milieu aide à éliminer les cryoprotecteurs des embryons ; Le saccharose évite le gonflement excessif des embryons, en restaurant leur environnement physiologique lors de la réhydratation.
Transférez les embryons dans une plaque contenant un milieu frais pour éliminer complètement les cryoprotecteurs, assurant ainsi une réhydratation complète. Les embryons décongelés sont prêts pour les procédures de transfert d’embryons.
Pour décongeler les embryons pour un transfert, placez la ministraw horizontalement, à 10 centimètres de la vapeur d’azote liquide pendant 20 à 30 secondes. Lorsque le processus de cristallisation commence à l’intérieur de la minipaille, plongez la paille dans un bain-marie à 25 degrés Celsius pendant 10 à 15 secondes. Retirez immédiatement les bouchons de paille et de coton, et utilisez un microdistributeur couplé pour expulser le contenu de la minipaille dans une plaque contenant un milieu de base à 25 degrés Celsius complété par une solution de saccharose à 0,33 molaire dans laquelle les embryons doivent rester pendant 5 minutes. Ensuite, transférez les embryons dans une assiette de milieu de base frais pour une autre incubation de 5 minutes.