Inactivation d’un gène médié par l’ARN en épingle à cheveux dans les iHSPC in vitro : un système d’expression shRNA basé sur le lentivirus Livraison dans les iHSPC pour l’inactivation de l’expression génique spécifique

Commencer par une culture de cellules souches et progénitrices hématopoïétiques immortalisées, iHSPC, dans des milieux contenant des hormones stéroïdes spécifiques et des cytokines hématopoïétiques, régulant la prolifération cellulaire dans un état indifférencié. Ajouter un polymère cationique approprié et des vecteurs lentiviraux.

Les virus recombinants portent des séquences codantes pour des ARN en épingle à cheveux courts, shRNA, dirigés vers un gène hôte spécifique et un gène marqueur de résistance aux antibiotiques.

Centrifugeuse pour sédimenter les cellules et les virus. Pendant l’incubation, les polymères cationiques neutralisent les charges de la membrane cellulaire, améliorant ainsi la liaison virale. Après la fusion membranaire, le matériel génétique viral et les enzymes sont libérés dans le cytoplasme cellulaire. Le génome viral est transcrit en sens inverse, se déplace dans le noyau et s’intègre dans le génome de l’hôte.

Sous l’influence d’un promoteur spécifique dans la construction, la construction du gène shRNA comprenant une séquence d’appariement d’ARNm cible, un segment de boucle et une autre séquence complémentaire à la première, est transcrite en formant un shRN