Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 3:12 min • July 8th, 2025
Commençons par un modèle de souris génétiquement modifié comprenant un génome modifié qui héberge des sites LoxP - des séquences spécifiques reconnues par les enzymes Cre-recombinase - flanquant le gène d’intérêt. La souris est ensuite transfectée avec un vecteur plasmidique codant pour la recombinase CreER spécifique à l’organe, conduisant à l’intégration de l’élément exprimant la recombinase CreER dans le génome des cellules hépatiques.
La recombinase CreER exprimée, une protéine de fusion inactive impliquant la Cre recombinase et le domaine mutant de liaison au ligand du récepteur des œstrogènes, ER, interagit et se lie à la protéine de choc thermique dans le cytoplasme. Cette liaison confine la recombinase CreER dans le cytoplasme.
Préparez une solution de tamoxifène, un médicament hydrophobe, en utilisant de l’éthanol et de l’huile appropriée. Maintenant, injectez la solution de tamoxifène par voie intrapéritonéale dans le quadrant inférieur gauche de l’abdomen de la souris pour éviter d’endommager les organes abdominaux.
Le tamoxifène injecté est métabolisé dans le foie en 4-hydroxytamoxifène, 4-OHT. De plus, la 4-OHT, un modulateur sélectif des récepteurs d’œstrogènes, se li
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