JoVE Encyclopedia of Experiments
Techniques biologiques
0 vues • 2:15 min • July 8th, 2025
Les nanolames sont des particules synthétiques ressemblant à des virus sans le matériel génétique viral encapsulé, ce qui en fait des transporteurs appropriés pour le fret étranger dans les cellules hôtes. Ces nanolames sont construites à l’aide du noyau rétroviral du virus de la leucémie de souris entouré de la membrane bicouche lipidique dérivée des cellules productrices eucaryotes utilisées pour assembler les nanolames in vitro.
La carotte contient l’enzyme Cas9 complexée avec l’ARNsg spécifique à la séquence du génome cible. Les protéines centrales sont entourées par les protéines d’enveloppe qui contiennent un domaine transmembranaire ou TM qui passe à travers la bicouche lipidique. Le TM se fixe à un domaine de surface glycoprotéique extracellulaire ou SU qui dépasse de la couche bicouche.
Pour utiliser les nanolames pour l’édition de gènes, prenez une culture de cellules cibles adhérentes et complétez-la avec la solution de nanolames. Dans la culture, le SU saillant d’une nanolame reconnaît le récepteur correspondant à la surface de la cellule hôte et se lie à celui-ci. Cela conduit à des modifications dans la structure du domaine SU, facilitant sa publication.
Ces changements déclenchent les changements conformationnels dans le domaine TM, qui se lie ensuite à la membrane hôte. Cette liaison amène la nanolame près de la cellule hôte, permettant la fusion de la membrane bicouche virale avec la membrane hôte, et le noyau viral se déplace dans le cytoplasme.
Une fois à l’intérieur de la cellule, le noyau se désintègre, libérant le complexe Cas9-sgRNA qui peut effectuer l’édition du génome sur son site cible.
Pour la transduction de cellules cibles avec des nanolames, remplacez le milieu de culture cellulaire par 500 microlitres du milieu contenant des nanolames purifiées. Après quatre à six heures d’incubation cellulaire, remplacez le milieu par la quantité normale de milieu frais.