Microinjection d’embryons de moustiques : une technique pour délivrer de l’ADN exogène dans le jaune d’embryon d’Anopheles gambiae afin de générer des mutations germinales

Pour micro-injecter de l’ADN exogène dans l’embryon d’anophèle, prélevez le nombre souhaité d’œufs de moustiques fraîchement récoltés, pré-blastodermes. À ce stade précoce du développement, l’ovule contient des noyaux sans former de structures cellulaires.

Placez les œufs en forme de bateau à la périphérie d’un papier buvard humide présent à la surface d’une lame de verre. Cette étape assure une hydratation adéquate de l’embryon pour faciliter l’injection dans les étapes suivantes. Alignez les œufs les uns à côté des autres avec leur surface ventrale exposée vers l’extérieur.

Maintenant, prenez une aiguille de micro-injection à calibre étroit contenant la solution plasmidique souhaitée. Utilisez un microscope à dissection pour positionner l’aiguille près du pôle postérieur de l’œuf - un site pour les précurseurs des cellules germinales. Insérez l’aiguille à un angle approprié pour qu’elle perce l’exochorion - la couche externe - et l’endochorion - une couche interne de la coquille de l’œuf - pour finalement atteindre l’embryon.

Injectez le mélange plasmidique dans le jaune de l’embryon. Rétractez doucement l’aiguille et laissez les ovules se développer dans des conditions approprié