Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 3:48 min • July 8th, 2025
Pour effectuer le transfert hydrodynamique de gènes, il faut commencer par prendre une seringue remplie d’une solution saline contenant des plasmides recombinants porteurs du gène d’intérêt. Par la suite, prenez un modèle de souris et injectez rapidement un grand volume de solution plasmidique à la base de la queue, en veillant à ce que la solution plasmidique soit injectée par voie intraveineuse dans la veine de la queue.
L’injection pressurisée d’un volume élevé de plasmides génère une force mécanique appelée force hydrodynamique, qui augmente la pression intravasculaire dans la veine cave inférieure - une veine qui transporte le sang désoxygéné vers le cœur.
Un grand volume de liquide induit une congestion dans le ventricule droit du cœur, forçant l’inversion dans le sens du sang. Cette étape force la solution plasmidique à pénétrer dans la veine hépatique, qui la transporte vers le foie.
Les plasmides se déplacent à l’intérieur des sinusoïdes hépatiques - les espaces du foie tapissés par les cellules endothéliales. L’augmentation du volume sanguin aide les plasmides à perméabiliser la couche endothéliale, ce qui les aide à se rapprocher des hépatocytes environnants - les cellules hépatiques.
L’afflux rapide de solution plasmidique induit une pression sur la membrane cellulaire des hépatocytes, générant des pores transitoires. Ces pores facilitent l’absorption de l’ADN plasmidique par les cellules. Plus tard, les pores de la membrane se ferment, piégeant les plasmides dans les hépatocytes.
L’expression réussie du gène d’intérêt dans les hépatocytes confirme la transfection.
Commencez par peser les souris, puis préparez une solution saline stérile contenant 15 microgrammes par millilitre de construction vectorielle saline de la belle au bois dormant sans endotoxines et 1 microgramme par millilitre de pc-HSB5 sans endotoxines. Préparez suffisamment de solution pour injecter à chaque souris un volume correspondant à 10 % de son poids corporel. Remplissez une seringue stérile de 3 millilitres avec le volume requis pour une souris et fixez-y une aiguille de calibre 27.
Après avoir ajouté une quantité appropriée de papier de soie pour laisser un minimum d’espace pour le mouvement, mais suffisamment d’espace pour respirer, insérez la souris dans un dispositif de contention approprié avec des trous de respiration. Réchauffez la queue à l’aide d’une lampe infrarouge pendant 30 à 60 secondes, tout en surveillant attentivement les signes de surchauffe, tels que le mouvement rapide de la queue ou d’autres signes d’agitation, puis nettoyez la queue avec un tampon imbibé d’alcool.
Insérez l’aiguille presque horizontalement dans l’une des deux veines latérales de la queue près de la base de la queue. S’il est placé avec succès, une petite quantité de sang peut refluer dans le cône de l’aiguille. Injectez le volume total dans la veine de la queue en 8 à 10 secondes. Après l’injection, retirez immédiatement la souris de la retenue. Compressez la plaie d’injection avec de la gaze stérile pendant au moins 30 secondes ou jusqu’à ce que tout saignement disparaisse.
Une injection hydrodynamique réussie de la veine caudale est cruciale pour la transfection, et dépend particulièrement de la vitesse, du volume et du temps d’injection. Pour faciliter l’injection intraveineuse, assurez-vous que les souris ne sont pas stressées ou déshydratées le jour de l’injection.
Après 30 à 60 minutes de logement en solo dans une cage de récupération, transférez la souris dans sa cage d’origine.