Transformation génétique médiée par Agrobacterium : une méthode pour transformer génétiquement le génome du riz via Agrobacterium tumefaciens génétiquement modifié

Agrobacterium tumefaciens, une bactérie phytopathogène, peut être génétiquement modifiée en introduisant un plasmide Ti préparé artificiellement, portant un gène d’intérêt dans sa région de transfert d’ADN ou d’ADN-T, et un plasmide auxiliaire portant les gènes de virulence ou Vir pour transférer l’ADN-T dans les cellules végétales.

Pour la transformation génétique médiée par Agrobacterium, commencez par une jeune inflorescence de riz et coupez-la en petits morceaux. Transférez les boutures dans un milieu de croissance et incubez pour faciliter la croissance des boutures en une masse cellulaire indifférenciée appelée callosité.

Maintenant, transférez le cal dans un milieu d’infiltration Agrobacterium contenant de l’acétosyringone - un chimioattractant pour Agrobacterium. Ensuite, ajoutez une culture d’Agrobacterium génétiquement modifiée au milieu et incubez brièvement.

Les molécules d’acétosyringone activent la protéine réceptrice cellulaire - VirA - sur la membrane d’Agrobacterium, qui médie ensuite la phosphorylation d’une protéine activatrice transcriptionnelle - VirG. Le VirG phosphorylé se déplace vers le plasmide auxiliaire et active la transcription d’une cascade de gènes d