Injection de périvitelline à base de vecteur lentiviral : une méthode pour transduire le gène d’intérêt dans des ovocytes de souris monocellulaires fécondés

Pour effectuer la transfection, prenez une chambre spécialisée contenant des œufs de souris fraîchement fécondés en suspension dans une goutte de milieu approprié. À ce stade, l’ovule contient un grand ovocyte central contenant les pronoyaux paternel et maternel.

L’ovocyte est recouvert d’une zone pellucide riche en glycoprotéines, entourée d’amas étroitement disposés de cellules cumulus intégrées dans la matrice extracellulaire riche en acide hyaluronique. Maintenant, traitez les ovules avec l’enzyme hyaluronidase, qui digère l’acide hyaluronique. Cela dissocie les cellules du cumulus, exposant finalement la zone pellucide entourant l’ovocyte.

Placez un seul ovocyte traité près de l’extrémité d’une pipette de retenue et appliquez une pression d’aspiration pour limiter sa position. Prenez une aiguille de micro-injection à calibre étroit contenant une suspension de vecteur lentiviral modifiée transportant un transgène encapsulé dans l’enveloppe virale. Ces rétrovirus ont la capacité inhérente de s’intégrer dans le génome de l’hôte.

Ensuite, percez l’aiguille à travers la zone pellucide pour atteindre l’espace périvitellin - un espace entre la zone pellucide la plus externe et la mem