Administration assistée par laser de gènes lentiviraux : une technique de perméabilisation d’ovules fécondés de souris pour faciliter l’administration de gènes lentiviraux

L’administration de gènes lentiviraux assistée par laser est une technique permettant de transférer un transgène dans un système hôte.

Pour produire des souris transgéniques, commencez par des œufs de souris fécondés isolés dans un milieu de culture approprié. Placez la boîte de culture contenant l’œuf fécondé sur une platine de microscope préinstallée avec un appareil laser et reliée à un logiciel de contrôle. Observez à un grossissement approprié.

Les ovules fécondés sont entourés d’une zone pellucide, une couche protectrice de glycoprotéines qui bloque les particules lentivirales. Pour pénétrer cette barrière, allumez l’appareil laser et assurez-vous que la LED laser est visible au-dessus de la zone pellucide. À l’aide du logiciel de contrôle, tirez le laser. Ajustez la durée de cuisson en fonction du diamètre de perforation souhaité.

Placez les œufs dans un incubateur pour les récupérer. Après une brève incubation, retirez les œufs et ajoutez des particules de lentivirus portant le gène d’intérêt et un marqueur fluorescent sélectionnable.

Avec la zone pellucide perforée, le lentivirus se diffuse facilement vers la membrane de l’ovule et pénètre par endocytose. Le lentivirus se