Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 3:50 min • July 8th, 2025
Pour une coloration négative des virus enveloppés, commencez par la suspension virale souhaitée. Incuber les virus avec du glutaraldéhyde, un fixateur chimique. Lors de la pénétration, le glutaraldéhyde réticule les protéines virales et les acides nucléiques, inactivant les virus tout en préservant la morphologie, facilitant ainsi la manipulation sûre des virus. Transférez ce mélange dans une assiette multi-puits.
Fixez des grilles de microscopie électronique à transmission, MET, contenant la capsule à une pipette via un coupleur. À l’aide de la pipette, aspirez le mélange virus-fixateur dans la capsule. Incuber l’ensemble de pipette pour que les virus s’adsorbent sur les surfaces de la grille.
Retirez le mélange. Lavez la capsule en éliminant les virus non adhérents et les fixateurs. Pipetez une solution d’acétate d’uranyle, un colorant à base de métaux lourds, dans la capsule. Incuber pour permettre au colorant d’entrer en contact avec les virus.
Les ions uranyle se lient à des glycoprotéines membranaires et à des phospholipides spécifiques sur les surfaces virales. Les ions peuvent pénétrer dans les virus et se lier aux protéines de la nucléocapside qui entourent le génome. Cett
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