Coloration H&E de coupes de tissus enrobées de paraffine : une technique de coloration différentielle pour visualiser des coupes de tissus hépatiques à l’aide d’une combinaison de colorants d’hématoxyline et d’éosine

Commencez la coloration à l’hématoxyline et à l’éosine en prélevant une lame de verre contenant la section de tissu incluse dans la paraffine. Trempez la lame dans une solution de déparaffinisation contenant du xylène - un solvant organique qui dissout la couche de paraffine autour du tissu, la rendant accessible aux taches dans les étapes suivantes.

Traitez la section de tissu avec de l’alcool absolu pour éliminer le xylène. Immergez le tissu dans des concentrations décroissantes d’alcool. Cette étape permet de réhydrater le tissu en remplaçant l’alcool par de l’eau pour une meilleure compatibilité avec les colorants solubles dans l’eau.

Teintez le tissu avec de l’hématoxyline basique, qui, sous sa forme oxydée, se lie au mordant - un cation métallique. Ce complexe se lie électrostatiquement aux acides nucléiques du génome, colorant le noyau en violet.

Immergez la section colorée dans une solution de différenciation acide pour éliminer l’excès d’hématoxyline du cytoplasme, ce qui donne une apparence distincte au noyau retenant le colorant. Traitez le tissu avec un agent bleuissant alcalin pour neutraliser les acides libres. Cela fait régresser la couleur violette du colorant vers le bleu, améliorant ainsi les détails nucléaires.

Immergez la lame dans une solution acide d’éosine pour colorer les composants protéiques de base dans le cytoplasme et les fibres du tissu conjonctif dans des tons allant du rouge au rose. Traitez les tissus avec de l’alcool pour éliminer l’excès d’éosine. Utilisez des concentrations croissantes d’éthanol pour déshydrater les tissus. Trempez la lame dans du xylène pour éliminer les réactifs restants.

À l’imagerie, les cellules de la coupe tissulaire montrent des noyaux bleu clair et des régions cytoplasmiques roses.

Déparaffinisez les lames en les immergeant dans du xylène à 100 %, deux fois, pendant 15 minutes à chaque fois. Ensuite, réhydratez les lames à travers un gradient d’éthanol. Pour chaque solution, trempez 8 à 10 fois, pendant deux secondes par trempage, jusqu’à ce que le liquide s’écoule proprement des lames. Placez les lames dans de l’hématoxyline Harris filtrée à 100 % pendant quatre minutes.

Après quatre minutes, transférez-les rapidement dans le récipient d’eau déminéralisée. Faites couler de l’eau désionisée dans le coin arrière du récipient le plus éloigné des sections. Videz le récipient périodiquement jusqu’à ce que l’eau ne soit plus violette.

Vérifiez rapidement l’intensité de l’hématoxyline sur un microscope à dissection à l’aide de lampes à col de cygne. Remettez les lames à 100 % d’hématoxyline pendant une minute, si une coloration supplémentaire est nécessaire.

Une fois que la coloration à l’hématoxyline souhaitée a été obtenue, trempez les lames deux fois dans de l’acide chlorhydrique à 0,05 %, puis transférez-les immédiatement dans le récipient avec de l’eau déminéralisée propre. Videz et remplissez deux fois le récipient d’eau.

Transférez les lames dans deux récipients d’éthanol à 95 % pendant 30 secondes chacun. Placez les lames dans la solution d’éosine Y phloxine-B pendant deux minutes.

Après les deux minutes, transférez les lames dans le récipient précédent d’éthanol à 95 %, puis vérifiez l’intensité de la couleur sous le microscope à dissection. Si la coloration n’est pas suffisante, retournez dans la solution d’éosine pendant 30 secondes. Répétez l’opération si nécessaire.

Lorsque la coloration de l’intensité souhaitée a été obtenue, transférez les lames à 100 % d’isopropanol pendant 15 secondes. Remplacez-les par de l’isopropanol frais à 100 % et remettez les lames dans l’isopropanol pendant 15 secondes supplémentaires. Répétez ce processus pour un total de six lavages à l’isopropanol.

Après avoir immergé dans du xylène à 100 % pendant trois minutes, retirez une lame, ajoutez suffisamment de support de montage pour couvrir les sections, puis trempez la lame dans du xylène à 100 %.

Appliquez une lamelle sur la glissière et épongez tout excès de support de montage sur une serviette en papier jusqu’à ce qu’il n’y ait plus qu’une fine ligne. Ensuite, trempez un mouchoir dans le xylène et essuyez l’arrière de la lame pour enlever tout milieu qui a coulé.

Placez la glissière à plat sur une surface solide mais mobile, comme un morceau de carton, et laissez le xylène s’évaporer dans la hotte pendant 10 minutes. Laissez les lames à température ambiante pendant la nuit pour permettre au support de montage de durcir avant l’imagerie.