Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
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Pour la coloration du cartilage, commencez par une section de cartilage fixée au formol et contenue dans de la paraffine provenant d’une souris euthanasiée.
Tout d’abord, plongez l’échantillon dans le substitut de xylène - un agent nettoyant non dangereux qui élimine la cire de paraffine et expose les tissus déshydratés. Ensuite, traitez l’échantillon avec des concentrations décroissantes d’éthanol pour réhydrater le tissu en vue d’une coloration ultérieure.
Maintenant, colorez l’échantillon avec de l’hématoxyline de fer de Weigert - une coloration organique contenant des ions ferreux - et incubez brièvement. Les molécules d’hématoxyline forment des complexes avec des ions ferreux et pénètrent dans la cellule. Les ions ferreux agissent comme un mordant et facilitent la liaison de l’hématoxyline aux acides nucléiques, leur conférant une couleur bleue.
Ensuite, traitez l’échantillon avec le colorant vert rapide - une contre-coloration qui se lie au tissu conjonctif et donne une couleur verte. Ensuite, traitez l’échantillon avec une solution d’acide acétique pour stabiliser les molécules de colorant. Enfin, colorez l’échantillon avec de l’orange safranine - un colorant cationique - et incubez.
Les molécules de safranine chargées positivement migrent vers les protéoglycanes chargés négativement dans le cartilage et se lient à eux, leur conférant une couleur rouge. Ensuite, montez la lame dans un support en résine et visualisez-la au microscope.
Le cartilage sain apparaît intensément rouge en raison de la matrice extracellulaire riche en protéoglycanes, tandis que le cartilage malsain apparaît moins rouge avec des signes de lésions tissulaires.
Pour effectuer une coloration Safranin-O, déparaffinisez d’abord les lames dans de l’oxylène pendant trois à cinq minutes, en répétant le bain d’oxylène deux fois. Ensuite, hydratez les lames dans un dégradé d’éthanol, en terminant par de l’eau distillée. Ensuite, placez les lames dans la solution d’hématoxyline de fer de Weigert, une solution Fast Green à 0,05 %, une solution d’acide acétique à 1 % et une solution de Safranin-O à 0,1 %. Maintenant, montez les lames à l’aide d’un support résineux.