Coloration au violet de crésyle de coupes de tissus : une procédure de coloration pour visualiser le cartilage et les os dans des coupes d’embryons de souris congelés

0 vues3:32 min • July 8th, 2025

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Pour visualiser les régions cartilagineuses et osseuses dans une coupe de tissu, commencez par une lame de verre portant une fine section de tissu d’embryon de souris congelée d’intérêt.

Décongelez brièvement la cryosection et plongez-la dans une concentration d’éthanol appropriée pour éliminer le milieu de cryo-enrobage. L’étape de retrait permet d’éviter le relâchement du milieu, qui pourrait autrement affecter la visualisation des tissus pendant la coloration. De plus, l’éthanol fixe les tissus, maintenant la morphologie et l’intégrité des tissus.

Ensuite, pipetez une solution de violet de crésyle sur le tissu. Le violet de crésyle, un colorant basique chargé positivement, se lie à des fractions polyanioniques telles que les protéoglycanes dans la matrice du tissu cartilagineux. Alors que, dans les tissus minéralisés tels que les os, il réagit avec des groupes chargés négativement tels que les groupes phosphate dans la matrice osseuse.

Étant un colorant métachromatique, le violet de crésyle colore différentes régions du tissu dans des couleurs différentes du colorant naturel en fonction de son interaction avec différents constituants chimiques au sein de ces régions.

Maintenant, lavez le tissu dans une concentration d’éthanol appropriée pour éliminer l’excès de tache. Immergez le tissu dans des concentrations croissantes d’éthanol pour remplacer l’eau du tissu, déshydratant ainsi le tissu. Lavez le tissu avec du xylène pour déplacer l’éthanol, ce qui rend le tissu transparent pour la microscopie.

Au microscope optique, le tissu cartilagineux apparaît magenta tandis que le tissu osseux apparaît brun, facilitant leur différenciation les uns des autres ainsi que des tissus environnants.

Préparez trois tubes à centrifuger de 50 millilitres étiquetés. Ajoutez 45 millilitres d’éthanol à 80 % dans chaque tube. Placez trois tubes sur de la glace. Placez un tube contenant 45 millilitres d’éthanol à 95 % et un tube contenant de l’éthanol à 100 % sur de la glace. Ensuite, ajoutez 45 millilitres de xylène dans un tube à centrifuger de 50 millilitres à température ambiante.

Décongelez brièvement une lame à membrane PEN en la plaçant contre une main gantée, et lavez-la deux fois pendant 30 secondes dans chacun des tubes contenant 80 % d’éthanol avec agitation, afin d’éliminer le composé de température de coupe optimal. Ensuite, posez la diapositive sur une feuille de papier d’aluminium. Pipetez 0,8 millilitres de 0,1 % de violet de crésyle dans de l’éthanol à 50 % sur la lame et colorez pendant 30 secondes.

Lavez la lame dans le troisième tube contenant 80 % d’éthanol pendant 30 secondes. Déshydratez la lame en la passant dans le tube contenant de l’éthanol à 95 % pendant 30 secondes, le tube contenant de l’éthanol à 100 % pendant 30 secondes, et enfin le tube contenant du xylène pendant 30 secondes. Après cela, placez les lames sur un essuie-glace délicat pendant 5 minutes pour laisser le xylène s’écouler et laisser sécher les sections.

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Dernière mise à jour : 1 août 2026