Coloration à la phosphatase acide résistante au tartrate : une technique in vitro pour détecter les ostéoclastes cultivés contenant l’enzyme TRAP
Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 3:08 min • July 8th, 2025
Les ostéoclastes sont de grandes cellules multinucléées en forme de dôme situées à la surface de l’os. Ces cellules contiennent de nombreux granules cytoplasmiques riches en phosphatase acide résistante au tartrate, ou TRAP - une enzyme métalloprotéique sécrétée par le bord ébouriffé des ostéoclastes dans le tissu osseux. Cette enzyme digère la matrice extracellulaire et dissout les cristaux minéraux, facilitant ainsi la résorption osseuse.
Pour détecter les granules TRAP en tant que marqueurs cytochimiques des ostéoclastes, prenez une boîte de culture contenant des ostéoclastes adhérents. Ajouter la solution de coloration TRAP dans les cellules. Cette solution comprend le substrat - un dérivé de naphtol contenant du phosphate et de l’acide tartrique dans un tampon complété par un sel de diazonium.
Ajoutez de l’acide acétique à cette solution pour maintenir le pH acide nécessaire à la coloration TRAP. Incuber les cellules dans l’obscurité à une température physiologique pour une activité enzymatique TRAP optimale.
La solution de coloration pénètre dans les ostéoclastes, où l’acide tartrique inhibe l’activité hydrolysante des phosphatases acides sensibles au tartrate dans d’autres c
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques