Coloration au rouge d’alizarine : une technique pour visualiser la minéralisation par des ostéoblastes cultivés

Les ostéoblastes sont des cellules osseuses qui sécrètent de petites vésicules dans leur matrice extracellulaire, la MEC. Ces vésicules, appelées vésicules matricielles, sont équipées de transporteurs membranaires et d’enzymes qui permettent l’entrée des ions calcium et phosphate, formant des cristaux minéraux à l’intérieur. Au fur et à mesure que les cristaux s’accumulent, ils percent la membrane de la vésicule pour former des nodules minéralisés dans l’ECM, constituant la densité minérale osseuse.

Pour visualiser la minéralisation, commencez avec des cellules ostéoblastiques sur un échafaudage biocompatible dans un milieu de croissance approprié. Les ostéoblastes se fixent à l’échafaudage et utilisent les facteurs de croissance du milieu pour sécréter des vésicules matricielles qui forment par la suite des nodules minéralisés dans la MEC.

Aspirez le milieu de culture et rincez les cellules pour éliminer toute trace de milieu. Traitez les cellules avec une solution de formol, qui induit la réticulation, la fixation et la préservation de la structure tissulaire de la MEC. Lavez les cellules pour éliminer tout formol restant.

Ensuite, ajoutez la solution de coloration au rouge d’ali