Coloration de Giemsa pour le test de formation de colonies : une procédure de coloration in vitro pour évaluer la capacité de prolifération des cellules souches mésenchymateuses

Les tests de formation de colonies mesurent la capacité proliférative des cellules à se développer en colonies.

Tout d’abord, une suspension cellulaire dérivée de la moelle osseuse comprenant des érythrocytes et des cellules mononucléaires, y compris des cellules souches mésenchymateuses ou CSM, dans des milieux sur une plaque de culture et incubée. Les CSM adhèrent au fond de la plaque tandis que les érythrocytes et les cellules mononucléées restent en suspension et sont jetés.

Ajouter des milieux frais contenant des facteurs de croissance pour favoriser la survie des CSM. En fonction de leur potentiel prolifératif individuel, les CSM se répliquent pour former des colonies.

Ensuite, traitez les colonies avec du méthanol. Le méthanol perméabilise les cellules, déplace l’eau de l’environnement intracellulaire et dénature les protéines, préservant ainsi l’architecture cellulaire.

Incuber les colonies fixées avec une solution de coloration Giemsa - un mélange de produits d’oxydation du bleu de méthylène, principalement de l’azur B, un colorant basique, et de l’éosine Y, un colorant acide. Lors de la diffusion dans les cellules, les dimères B azur chargés positivement se lient par inte