Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
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Les protéoglycanes sont composés d’une protéine centrale attachée de manière covalente à des chaînes de glycosaminoglycanes sulfatés.
Pour visualiser les protéoglycanes, commencez par des échafaudages à base de collagène - le substrat polymère poreux - et ensemencez-y la suspension de cellules souches mésenchymateuses, ou CSM. Cela fournit un support structurel aux MSC et leur permet de se développer à la surface ainsi qu’à l’intérieur des cavités des échafaudages.
Traiter les constructions dans un milieu de différenciation chondrogénique contenant des facteurs de croissance transformants qui entraînent la transformation des CSM en chondrocytes matures - cellules cartilagineuses. Les chondrocytes matures sécrètent des protéoglycanes qui forment un réseau avec le collagène de l’échafaudage.
Prenez une section préparée à partir de la construction chargée de chondrocytes. Ajouter une solution acide de colorant bleu d’alcian complétée par du chlorhydrate de guanidium et incuber. Pendant l’incubation, le chlorhydrate de guanidine dans la solution de colorant dissocie tous les agrégats de protéoglycanes pour une meilleure coloration.
Par la suite, les glycosaminoglycanes sulfatés chargés
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