Coloration de Papanicolaou : une technique pour visualiser les caractéristiques cytologiques des cellules tubaires

L’épithélium de la trompe de Fallope comprend des cellules sécrétoires qui produisent un liquide riche en nutriments et des cellules ciliées qui propulsent l’ovule baigné de liquide vers l’utérus. Des changements morphologiques et une perte fonctionnelle des cellules tubaires sont associés au cancer de la trompe de Fallope.

Pour visualiser la morphologie tubaire, prenez une lame enduite de tissu et trempez-la dans de l’éthanol pour fixer ses caractéristiques cytologiques. Rincez la lame à l’eau pour éliminer l’excès de fixateur.

Maintenant, trempez la lame dans de l’hématoxyline, un colorant cationique qui lie l’ADN chargé négativement, colorant le noyau en bleu. Rincez la lame avec de l’eau puis de l’éthanol pour éviter les taches excessives.

Ensuite, immergez la lame dans un colorant Eosin Azure - une solution polychrome de brun Bismarck, d’Eosin Y et de vert rapide mélangée à de l’acide phosphotungstique. Le brun Bismarck précipite l’acide phosphotungstique, un mordant utilisé par l’éosine Y, et le vert rapide pour colorer différemment les cellules tubaires non cancéreuses et les cellules cancéreuses métaboliquement actives.

Répétez l’étape de rinçage à l’eau-alcool. Enfin, immergez la lame dans du xylène - un agent nettoyant qui élimine les composants de teinture en excès. Ensuite, montez la lame et visualisez-la au microscope.

L’épithélium normal de la trompe de Fallope se présente sous la forme d’une couche organisée de cellules colorées, ciliées et sécrétoires en bleu clair. En revanche, les cellules malignes de l’épithélium apparaissent comme des amas de cellules avec des noyaux sombres.

Avant de colorer les cellules, chargez le flacon d’échantillon dans un processeur automatisé pour la préparation des lames. Lorsque les lames sont prêtes, trempez les échantillons dans de l’éthanol à 95 %, 10 fois, pendant 1 seconde par trempage, suivi de 10 trempages dans l’eau, pendant 1 seconde par trempage.

Ensuite, immergez les lames dans de l’hématoxyline pendant 10 à 60 secondes, puis effectuez un deuxième lavage à l’eau et à l’éthanol. Après la dernière immersion à l’éthanol, immergez les lames dans Eosin Azure pendant 1 à 3 minutes, suivies d’un autre rinçage à l’éthanol à l’eau. Ensuite, trempez les lames dans du xylène ; jusqu’à ce que les échantillons deviennent clairs.