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Techniques biologiques
0 vues • 2:49 min • July 8th, 2025
La fibrose est un dépôt accru de collagène fibrillaire dans la matrice extracellulaire du tissu endommagé. Structurellement, il comprend des chaînes polypeptidiques de collagène à triple hélice.
Pour colorer le collagène avec un colorant rouge picrosirius, prélevez une section de tissu cardiaque fixée au paraformaldéhyde et incorporée dans de la paraffine. Immergez la section de tissu dans du xylène - un solvant organique - pour dissoudre la cire environnante.
Traitez séquentiellement le tissu déparaffinisé avec des concentrations décroissantes d’alcool pour remplacer le xylène. Immergez le tissu dans l’eau pour le réhydrater afin d’obtenir une meilleure visualisation des taches dans les étapes suivantes.
Trempez le tissu dans une solution de rouge picrosirius contenant du rouge de Sirius - un colorant azoïque anionique - et de l’acide picrique.
Sirius red contient des groupes sulfoniques acides qui interagissent avec les groupes aminés de base de la lysine, de l’hydroxylysine et de l’arginine présents dans le collagène. L’acide picrique aide à maintenir le pH acide, facilitant la liaison des molécules de colorant dans une orientation parallèle avec le collagène.
Rincez les lames dans une solution de décoloration acidifiée pour éliminer l’excès de tache. Placez une goutte de support de montage sur la lame et observez-la au microscope à fond clair.
La zone fibreuse contenant du collagène apparaît rouge vif par rapport aux régions non fibreuses de couleur jaune.
Après avoir fixé le tissu cardiaque, placez-le sur un appareil de sectionnement de tissus, coupez-le en tranches de 2 millimètres d’épaisseur et placez les sections dans une cassette d’enrobage.
Après l’enrobage de paraffine et la section supplémentaire selon le protocole de texte, déparaffinisez les lames en les plaçant dans un réservoir de xylène pendant 30 minutes. Ensuite, réhydratez le tissu dans une série d’alcool diluée séquentiellement, suivie d’eau distillée.
Ensuite, utilisez une solution de rouge picrosirius adéquate pour couvrir complètement les sections de tissus et incubez pendant une heure. Ensuite, utilisez une solution d’acide acétique à 0,5 % pour rincer les lames deux fois et rincer les échantillons deux fois dans de l’alcool absolu.
Faites sécher les échantillons à l’air libre et montez-les dans de la résine synthétique à l’aide d’une lamelle. Ensuite, utilisez la lumière visible sous un microscope à un grossissement de 200X pour imager les lames.