Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 2:30 min • July 8th, 2025
Chez les plantes, la lignine - un biopolymère complexe - est généralement déposée dans les parois cellulaires des tissus pour fournir un soutien.
La lignification se trouve principalement dans les épaississements de la paroi cellulaire secondaire des cellules du xylème conductrices d’eau, telles que les vaisseaux et les fibres, et les cellules extra-xylaires, telles que les fibres interfasciculaires.
Structurellement, la lignine est composée de précurseurs de monolignol réticulés. Ces alcools aromatiques polymérisent, formant une structure très ramifiée. Cette caractéristique améliore la force et la rigidité de la plante.
Pour visualiser le dépôt de lignine à l’aide de la coloration de Wiesner, prenez des coupes transversales de tige de dicotylédones incrustées d’agarose dérivées de la partie centrale ou inférieure de la plante. Ajoutez-les dans un tube de microcentrifugation contenant un tampon approprié.
Ajoutez la solution de coloration préparée, qui contient du phloroglucinol acidifié et de l’éthanol, aux sections de tige. Les alcools présents dans la lignine réagissent avec le phloroglucinol et l’éthanol pour donner un pigment rose. Il en résulte le développement d’une coloration rose correspondant au dépôt de lignine dans les parois cellulaires des cellules spécialisées.
Maintenant, transférez la section colorée sur une lame microscopique. Placez doucement une lamelle sur la section, en évitant les bulles, pour aider à mieux la visualiser. Visualisez les coupes au microscope optique.
La coloration rose dans les cellules spécialisées du xylème et les fibres interfasciculaires dans les coupes transversales de la tige confirment la présence de lignine dans ces tissus.
Pour la coloration au phloroglucinol, transférez les sections de tige dans un tube de microcentrifugation. Ajoutez 1 millilitre de solution de phloroglucinol dans le tube et bouchez-le immédiatement car l’acide chlorhydrique contenu dans la coloration au phloroglucinol est très corrosif. Déplacez doucement le tube pour vous assurer que toutes les sections sont tachées. Pipetez doucement les sections dans une pointe de pipette coupée et sur une lame de microscope. Couvrez les sections avec une lamelle. Observez les sections sous un éclairage en fond clair. La solution sèche en 5 à 10 minutes, ce qui entraîne une détérioration des échantillons, par conséquent, l’imagerie doit être terminée dans ce laps de temps.