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Techniques biologiques
0 vues • 2:44 min • July 8th, 2025
La lignine est un composant structurel important de la paroi cellulaire végétale. Il s’agit d’un polymère composé principalement d’alcools syringyliques, ou unités S-lignine, et d’alcools gaïacyliques, ou unités G-lignine, et d’une population mineure d’alcools para-coumaryliques appelés unités H-lignine.
La teneur en S-lignine diffère dans divers tissus végétaux secondaires. On le trouve principalement dans les vaisseaux et les fibres xylaires et les fibres interfasciculaires, où il fournit un support structurel.
Pour détecter la présence de S-lignine, prélever des coupes transversales de tiges de dicotylédones incrustées d’agarose dans un tube. Traitez les sections de tige séquentiellement avec une solution de coloration au permanganate de potassium, suivie d’acide chlorhydrique dilué et, enfin, avec de l’hydroxyde d’ammonium - une base faible.
Au cours de ce traitement, la fraction S-lignine présente dans la paroi cellulaire subit une série de modifications pour finalement générer un produit qui apparaît rouge.
L’intensité de la coloration rouge est plus faible dans les cellules du xylème en raison de la présence de moins de S-lignine par rapport aux fibres interfasciculaires, qui apparaissent d’un rouge plus profond. Transférez les coupes sur une lame et visualisez-les au microscope optique.
La variation de l’intensité du rouge aide à comprendre le rapport relatif de la S-lignine dans les tissus végétaux lignifiés.
Pour la coloration Maule, transférez les sections de tige dans un tube de microcentrifugation. Ajouter 1 millilitre de la solution de permanganate de potassium à 0,5 % dans le tube contenant les sections. Pipetez doucement la solution de permanganate de potassium à 0,5 % de haut en bas, de préférence, sans déranger les sections.
Après une incubation de 2 minutes et un pipetage répété, laissez le tube de microcentrifugation reposer jusqu’à ce que toutes les sections se stabilisent. À l’aide d’une pipette de 1 millilitre, prélevez 700 microlitres de solution de permanganate de potassium à 0,5 %. Ajoutez 700 microlitres d’eau distillée pour rincer le permanganate de potassium. Répétez l’opération trois à quatre fois ou jusqu’à ce que la solution aqueuse reste claire.
Après avoir jeté l’eau, ajoutez rapidement 1 millilitre d’acide chlorhydrique à 3 % jusqu’à ce que la couleur brun foncé soit évacuée des sections. Cela peut se produire dans les 3 à 5 minutes ou peut nécessiter deux lavages de 5 minutes chacun. Pipetez toute la solution d’acide chlorhydrique à 3 % et ajoutez immédiatement 1 millilitre de solution concentrée d’hydroxyde d’ammonium avant d’imager sous un éclairage en fond clair.