Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 2:59 min • July 8th, 2025
Pour la séparation par chromatographie d’échange d’anions d’une protéine d’intérêt d’un lysat de protéine bactérienne dialysée, ajoutez un tampon de liaison pour réduire la viscosité du lysat et l’empêcher d’obstruer la colonne chromatographique.
Les agents chélateurs contenus dans le tampon se lient aux cations divalents, inhibant l’activité de la protéase et empêchant la dégradation des protéines. De plus, le tampon avec un pH supérieur au point isoélectrique de la protéine cible, pI, le pH auquel la protéine n’a pas de charge nette, fait que les ions hydroxyles chargés négativement en excès neutralisent les groupes amines chargés positivement de la protéine, rendant la surface de la protéine chargée négativement.
Assemblez la colonne de chromatographie échangeuse d’anions contenant une phase stationnaire réticulée à base d’agarose avec des groupes amines quaternaires chargés positivement. Ajoutez le tampon de liaison pour préparer la colonne à une interaction maximale avec les protéines pendant le chargement de l’échantillon. Chargez le lysat bactérien dilué.
Les protéines cibles chargées négativement se lient plus étroitement aux groupes chargés positivement dans la colonne que
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