Chromatographie d’interaction hydrophobe dépendante du calcium : une technique de purification des protéines de liaison au calcium basée sur des interactions hydrophobes
Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 3:22 min • July 8th, 2025
La chromatographie d’interaction hydrophobe dépendante du calcium est une technique permettant de séparer les protéines de liaison au calcium des autres protéines non liantes au calcium dans un échantillon.
Pour commencer, prenez une colonne de chromatographie pré-assemblée contenant une matrice de billes d’agarose réticulées dérivées de groupes phényles hydrophobes pour faciliter les interactions avec les protéines cibles. Equilibrez-le avec un tampon de liaison contenant une très forte concentration d’ions calcium pour une interaction maximale entre la résine et la protéine cible lors du chargement ultérieur de l’échantillon.
Prélever un échantillon contenant le mélange de protéines dialysées et le compléter avec une concentration égale de chlorure de calcium comme utilisé dans le tampon de liaison pour l’équilibrage de la colonne. Cela maximise la liaison des protéines à la colonne.
Les ions calcium se lient à des protéines spécifiques du lysat, induisant un changement de conformation dans ces molécules de protéines exposant leurs régions hydrophobes.
Filtrez le mélange pour séparer les impuretés et les agrégats afin d’éviter qu’ils n’obstruent la colonne. Chargez ce filtrat dan
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