Purification de protéines basée sur la chromatographie d’affinité du nickel : une technique pour purifier des protéines recombinantes marquées à la polyhistidine à partir d’un lysat de cellules bactériennes

Pour purifier la protéine recombinante fusionnée à un marqueur poly-histidine - une chaîne de résidus d’histidine à une extrémité - à partir d’un lysat de cellule bactérienne, diluez d’abord le lysat cellulaire pour éviter le colmatage de la colonne pendant l’exécution chromatographique.

Assembler une colonne d’affinité contenant des cations nickel divalents immobilisés sur une matrice de billes d’agarose à l’aide d’acide nitrilotriacétique, un agent chélateur. L’acide nitrilotriacétique se lie aux cations nickel via quatre sites covalents de coordination, tandis que deux sites sur l’ion métallique restent disponibles pour des interactions avec des marqueurs polyhistidines dans la protéine d’intérêt.

Équilibrez la colonne avec un tampon approprié pour optimiser les conditions d’interactions métal-protéine efficaces. Chargez le lysat cellulaire sur la colonne.

Les protéines recombinantes, portant des résidus d’histidine terminaux accessibles, forment des liaisons de coordination avec les cations nickel en raison de la grande affinité de l’ion métallique pour l’imidazole, la chaîne latérale de l’histidine, et se lient à la matrice. Le nombre élevé d’histidines consécutives dans la pr