Purification de baculovirus basée sur la chromatographie d’affinité d’héparine : une technique pour isoler le baculovirus du surnageant de cellules d’insectes

Les baculovirus - des virus à ADN double brin - sont entourés d’une enveloppe contenant les principales glycoprotéines virales, comme la GP64.

Pour isoler les baculovirus d’un surnageant de culture cellulaire contenant des débris cellulaires et des protéines contaminantes, assemblez une colonne de chromatographie d’affinité à l’héparine contenant une matrice de billes d’agarose réticulées. Ces billes sont couplées à l’héparine, un polysaccharide linéaire avec des groupes sulfates, qui confèrent une charge négative à la chaîne d’héparine.

Équilibrez la colonne avec un tampon de lavage ayant un pH neutre et une force ionique optimale pour fournir des conditions favorables à des interactions maximales entre le baculovirus et l’héparine pendant le chargement du surnageant. Chargez le surnageant contenant le baculovirus sur la colonne.

Les acides aminés basiques du baculovirus GP64 facilitent les interactions électrostatiques non spécifiques avec l’héparine chargée négativement et se lient étroitement à la colonne, contrairement aux contaminants qui se lient lâchement. Rincez la colonne avec un tampon de lavage, en éliminant les protéines et les débris contaminants non liés et faiblemen