Chromatographie échangeuse de cations : technique d’isolement d’une protéine recombinante cible à partir d’un lysat de cellule d’insecte sur la base de la charge de surface nette
Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 3:33 min • July 8th, 2025
La chromatographie échangeuse de cations facilite la séparation des protéines des mélanges en fonction de leur charge de surface nette.
Pour isoler la protéine du transducteur de signal cible à partir du lysat de protéines de cellules d’insectes, obtenir un lysat de protéines cibles dialysé contenant d’autres protéines contaminantes. Ajoutez un tampon contenant du chlorure de sodium pour réduire la viscosité du lysat et améliorer la solubilité des protéines, ce qui aide à prévenir l’obstruction de la colonne chromatographique pendant le fonctionnement.
De plus, le pH tampon en dessous du point isoélectrique de la protéine cible, pI, auquel la protéine a une charge nette nulle, facilite la liaison des ions hydrogène en excès aux groupes carboxylates négatifs, ce qui rend la protéine cible chargée positivement.
Assembler la colonne chromatographique contenant des billes d’agarose réticulées couplées à des groupes chargés négativement. Ajoutez un tampon de liaison pour équilibrer la colonne et maximiser les interactions colonne-protéine. Chargez le lysat dilué sur la colonne équilibrée.
Les protéines cibles chargées positivement interagissent et se lient étroitement aux groupes chargé
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