Chromatographie liquide à interaction hydrophile : une technique pour séparer les analytes polaires hydrophiles à l’aide de billes hydrophiles

La chromatographie liquide à interaction hydrophile, HILIC, est une technique permettant de séparer les composés polaires hydrophiles en fonction de leur degré de polarité. Commencez par mettre en place une colonne HILIC remplie de billes hydrophiles portant des groupes fonctionnels polaires.

Tout d’abord, conditionnez la colonne à l’aide d’un tampon d’équilibrage et d’une phase mobile - un mélange de solvant organique et d’eau. Les molécules tampons stabilisent le pH, tandis que le solvant organique sature la colonne. Les molécules d’eau s’immobilisent et créent une couche aqueuse sur les billes hydrophiles.

Chargez l’échantillon contenant un mélange de glycanes - composés polaires hydrophiles - étiqueté avec une étiquette fluorescente. Faites passer l’échantillon à l’aide d’un gradient de phase mobile à travers la colonne à un débit optimal.

Au fur et à mesure que l’échantillon se déplace le long de la phase mobile hydrophobe, les glycanes migrent dans la couche aqueuse, laissant derrière eux les impuretés. Par la suite, les glycanes se déplacent vers les groupes fonctionnels polaires sur les billes. Ici, plus de glycanes polaires se lient fortement, tandis que moins de glycanes