Séparation basée sur la chromatographie d’exclusion stérique des vésicules extracellulaires bactériennes : une technique pour séparer une population hétérogène de vésicules de membrane externe bactérienne à Gram négatif en fonction de leur taille

Dans des conditions de culture appropriées, les bactéries à Gram négatif libèrent des vésicules de membrane externe transportant des marchandises, ou OMV, dans le surnageant. Ces vésicules sont de petites structures sphériques de taille hétérogène, qui interviennent dans la communication cellulaire.

Pour fractionner des sous-populations d’OMV de différentes tailles, prenez une colonne de chromatographie d’exclusion stérique vide avec un filtre approprié à sa base pour soutenir la matrice.

Emballez la colonne avec une matrice de filtration de gel composée de billes sphériques chimiquement inertes de taille de pores définie, en veillant à ce que la taille soit optimale pour empêcher les OMV de grande taille d’entrer. Equilibrez la colonne avec un tampon approprié pour éviter que les billes ne sèchent pour une purification optimale.

Chargez le surnageant de culture bactérienne contenant des sous-populations de différentes tailles d’OMV, d’agrégats de protéines et d’acides nucléiques sur le dessus de la colonne. Laissez les échantillons s’écouler sous l’effet de la force de gravité.

Au fur et à mesure que les échantillons traversent la colonne, les OMV plus grands, qui ne peuvent pas p