Chromatographie liquide à haute performance en phase inverse : une méthode robuste pour la quantification d’acides sialiques marqués par fluorescence et dérivés isolés du foie de souris

Les acides sialiques, tels que l’acide N-acétylneuraminique et l’acide N-glycolylneuraminique, sont des fractions glucidiques chargées négativement que l’on trouve aux extrémités distales des chaînes d’oligosaccharides à la surface des cellules de mammifères.

Pour quantifier les quantités relatives de ces acides sialiques dans le tissu hépatique de souris à l’aide de la chromatographie liquide à haute performance en phase inverse ou RP-HPLC, traitez d’abord le mélange isolé d’acide sialique avec un agent de dérivatisation. L’agent de dérivatisation interagit avec les groupes fonctionnels des acides sialiques, générant des dérivés stables et fluorescents de l’acide sialique.

Assemblez une colonne RP-HPLC, connectée à un détecteur de fluorescence. La colonne comprend une phase stationnaire poreuse à base de silice liée à des ligands de chaînes alkyles non polaires et hydrophobes pour faciliter les interactions sélectives avec les dérivés de l’acide sialique pendant l’exécution chromatographique.

Équilibrer la colonne à l’aide d’une phase mobile polaire aqueuse contenant de faibles concentrations d’acétonitrile, un solvant organique moins polaire, pour un conditionnement optimal de la