Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 3:05 min • July 8th, 2025
Les protéines membranaires intégrales bactériennes, ancrées aux membranes bicouches lipidiques, facilitent le transport des molécules à travers les membranes et la transduction des signaux. Pour les études structurales, des protéines recombinantes membranaires intégrales spécifiques sont surexprimées avec la protéine fluorescente verte fusionnée, GFP.
Pour évaluer la stabilité des protéines membranaires recombinantes après solubilisation au détergent, obtenir une fraction membranaire bactérienne contenant des protéines membranaires intégrales marquées à la GFP. Ajoutez un détergent non ionique. Au-delà de la concentration critique, le détergent forme des micelles.
Les micelles interagissent avec les membranes lipidiques et les protéines membranaires, solubilisant les membranes et formant des complexes protéine-détergent. De plus, les régions transmembranaires hydrophobes des protéines membranaires peuvent rester non masquées, provoquant l’agrégation des protéines. De plus, des GFP libres peuvent résulter de la dégradation des protéines membranaires.
Centrifugez le mélange. Recueillir le surnageant contenant une fraction solubilisée dans un détergent.
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