Chromatographie d’affinité basée sur DFE : une technique de purification d’anticorps monoclonaux 2F5 à partir d’un échantillon brut à l’aide de conditions d’élution basées sur une force ionique élevée
Encyclopédie des expériences JoVE
Techniques biologiques
0 vues • 3:41 min • July 8th, 2025
L’épitope DFE ou DsRed-2F5 est une protéine de fusion recombinante comprenant DsRed, une protéine fluorescente, et l’épitope 2F5 - un segment de l’antigène de la glycoprotéine d’enveloppe du VIH-1. Cet épitope a une grande affinité pour son paratope - une région de la région déterminant la complémentarité sur l’anticorps monoclonal 2F5.
Pour purifier les anticorps monoclonaux 2F5 d’un échantillon brut, prélevez à leur surface une colonne remplie de billes de résine poreuse contenant des ligands d’affinité DFE immobilisés. Rincez la colonne avec un tampon d’équilibrage approprié pour maintenir le pH et éviter les interactions non spécifiques entre les composants de l’échantillon et la résine dans les étapes suivantes.
Chargez l’échantillon contenant les anticorps monoclonaux cibles 2F5 dans la colonne. Peu à peu, les anticorps de l’échantillon commencent à circuler dans la colonne ou la phase stationnaire.
Au cours du flux, les anticorps interagissent de manière réversible avec les ligands d’affinité DFE immobilisés sur la phase stationnaire. Dans ces interactions, le paratope de l’anticorps 2F5 se lie spécifiquement à son épitope complémentaire sur le ligand DFE.
Lavez la colonne a
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